主权项 |
一种杜仲组织培养方法,其特征在于包括以下步骤:(1)芽诱导培养:以华仲5号杜仲带芽茎段作为外植体,剪去叶片,切成3.0~5.0长的带有2~3个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡5~10min,再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除,然后用自来水冲洗1~3h后置于超净工作台中,先用75%乙醇消毒5~30s后用无菌水洗3~5次,再用0.1%升汞溶液消毒10~25min,用无菌水冲洗4~6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导,接种后先在25~28℃条件下全暗培养1~3天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为1500~2000lx条件下培养30天,统计其芽诱导率及生长情况;(2)增殖培养:将步骤(1)培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养1~3天,然后置于每天光照10~12小时,光照强度为1000~2000lx,置于培养温度为25~28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况,多次反复切割芽体进行继代培养,得到丛生芽;(3)生根培养:将步骤(1)或(2)过程获得的高度约为2.5~3.5cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养,接种后先在25~28℃条件下全暗培养1~3天,然后置于每天光照11~12小时,光照强度为2000~3000lx,培养温度为25~28℃的条件下培养1个月后统计生根情况;(4)炼苗移栽:将步骤(3)获得的高约6~8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5~7天后,将试管苗从培养瓶中取出,洗掉根部培养基,栽入由营养土:珍珠岩=3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养,每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水,保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。 |