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一种提高苹果无菌苗叶片出愈率和出芽率的方法，其特征是：依次包括下列步骤：⑴ 苹果茎尖的消毒和灭菌取春季取刚萌动的苹果新梢，用流动的自来水冲洗干净后，剥取茎尖，用75%的酒精消毒30~40s，再用无菌水冲洗干净，然后用0.1％的升汞消毒3~4 min，再用无菌水冲洗3~4遍，用无菌滤纸吸去多余水分后接种；（2）苹果无菌苗的获得每个100ml的培养瓶接种5~7个苹果茎尖，培养条件为每天光照12 h，光照强度2000 lx，培养温度26℃；培养30d后获得5~6cm高的苹果无菌苗；（3）苹果无菌苗叶片的切割取上述苹果无菌苗充分展开的叶片，在垂直主脉方向两侧各切2~3刀，不切透叶缘和主脉并保持叶片完整，叶片反面朝上平铺在分化培养基上；分化培养基组成是：MS+6‑BA 4.0 mg/L＋NAA 0.05 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7 g/L，pH为5.8；（4）苹果叶片愈伤组织和芽的诱导经步骤（3）苹果无菌苗叶片接种10d后，叶片颜色仍为绿色，稍膨大，叶片切口边缘处翘起，多数叶片在切口处形成少量白色或淡绿色的愈伤组织，愈伤组织结构较疏松；随着培养时间的延长，愈伤组织逐渐膨大变多，20d后苹果叶片开始分化形成大量不定芽；（5）生根培养待幼芽长到2~3cm大小时，在超净工作台上切下幼芽，将切取的幼芽转入生根培养基上培养；生根培养基为：1/2MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7 g/L，pH为5.8。 |
