一种利用卵泡抑素Follistatin促进绵羊体外胚胎发育的方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种利用卵泡抑素Follistatin促进绵羊体外胚胎发育的方法，步骤如下：（1）获取宰杀后绵羊卵巢；（2）抽吸卵泡备用；（3）选择的卵母细胞，在CO₂培养箱内培养，加入装有体外受精液的液滴内；（4）放入体外受精液滴，与卵母细胞共同孵育；（5）将早期胚胎取出，移至含有10μg/L Follistatin的体外培养液洗涤3-4次，并再次培养24-26小时；（6）将胚胎取出，用体外培养液洗涤，统计卵裂率，培养144-168小时后统计囊胚率。通过卵泡抑素Follistatin对绵羊卵母细胞体外受精后的早期胚胎进行处理，能显著提高体外胚胎发育囊胚率。

主权项

一种利用卵泡抑素Follistatin促进绵羊体外胚胎发育的方法，其特征在于：该方法步骤如下：（1）在绵羊屠宰场获取宰杀后30分钟以内的绵羊卵巢，置入温度在30‑35℃，含1000IU/ml青霉素和1000IU/ml链霉素的生理盐水中，3‑5小时内用生理盐水清洗3‑4次；（2）然后，用吸有2ml抽卵液注射器抽吸卵巢表面2‑5mm大小的卵泡，将注射器内回收的卵泡液置于器皿中，在显微镜下捡出卵母细胞，用体外成熟液洗涤3‑5次，备用；（3）将步骤（2）中选择的卵母细胞，在条件为5% CO₂，95%空气，温度为38.6℃的CO₂培养箱内培养22‑24小时，用绵羊体外受精液洗涤2‑4次，按25‑30枚/滴的密度加入装有体外受精液的液滴内，备用；（4）将解冻后的冻精，放入装有体外受精液的试管内，CO₂培养箱内培养20‑25分钟，取上清液，以1500转/分钟的转速离心4‑5分钟弃去上清液，用剩余的精子沉淀进行密度计算，按2‑4×10⁶个/ml的密度加入步骤（3）的体外受精液滴，与卵母细胞共同孵育；（5）将步骤（4）中受精20‑22小时的早期胚胎取出，移至含有10μg/L Follistatin的体外培养液IVC1内洗涤3‑4次，并再次培养24‑26小时；（6） 将步骤（5）中在IVC1内培养24‑26小时后的胚胎取出，再用常规的体外培养液IVC2洗涤3‑4次，统计卵裂率，并继续培养，144‑168小时后统计囊胚率。