一种凝血酶/鞣酸多层膜复合壳聚糖止血海绵的制备方法

摘要

本发明公开的凝血酶/鞣酸多层膜复合壳聚糖止血海绵的制备方法，步骤包括制备壳聚糖多孔海绵；利用层层自组装法在壳聚糖海绵上组装凝血酶/鞣酸多层膜；将组装好的复合海绵静置过夜脱水，冷冻干燥。本发明通过调节凝血酶/鞣酸双分子层的层数，可以实现凝血酶载药量的调控，即止血效果的可调控。制得的凝血酶/鞣酸多层膜复合壳聚糖止血海绵与自由态凝血酶相比，凝血酶的存储稳定性大大提高，具有止血速度快、效果好的优点，有望应用于战伤和院前急救止血。

主权项

一种凝血酶/鞣酸多层膜复合壳聚糖止血海绵的制备方法，其特征在于步骤如下：1）将壳聚糖粉末溶于乙酸中，配制质量浓度为1~5%的壳聚糖溶液，抽滤后加入过量氢氧化钠水溶液至凝胶完全沉淀，搅拌得凝胶颗粒悬浮液，用三蒸水冲洗至中性，加入丙三醇溶液增塑，然后离心，注入模具中，静置脱泡，冰冻后再冷冻干燥，得到壳聚糖多孔海绵；2）将冷冻干燥的壳聚糖海绵用紫外照射的方式灭菌；3）将BPEI溶解在PBS 中，配置质量浓度为1~3mg/mL的BPEI溶液，称为A液；将鞣酸溶解在PBS中，配置质量浓度为1~3mg/mL的鞣酸溶液，称为B液；将凝血酶溶解在PBS中，配置质量浓度为1~3mg/mL的凝血酶溶液，称为C液；4）将步骤2)的壳聚糖海绵浸泡入A液中至少20min，取出，用PBS反复冲洗后放置在筛网上静置至少10min；5）将步骤4)处理得到的壳聚糖海绵放入B液中浸泡至少15min，取出，用PBS反复冲洗后放置在筛网上静置至少10min；6）将步骤5)处理得到的壳聚糖海绵放入C液中浸泡至少15min，取出，用PBS反复冲洗后放置在筛网上静置至少10min，得到一个凝血酶/鞣酸双分子层的壳聚糖海绵；上述步骤3)至步骤6)中所述的PBS 的pH值均为7.3；7）重复步骤5）和步骤6）n次，得到n个凝血酶/鞣酸双分子层的壳聚糖海绵，再将其放置在筛网上过夜，在 ‑20℃预冷冻至少6个小时，再冷冻干燥，得到凝血酶/鞣酸多层膜复合壳聚糖止血海绵。