叶绿体DNA的SNP标记鉴定大豆雄性不育细胞质方法

摘要

发明提供了一种叶绿体DNA的SNP标记鉴定大豆雄性不育细胞质方法，该方法也可应用于区分大豆细胞质雄性不育系和含有正常细胞质的保持系。该方法包括如下步骤，提取大豆细胞质雄性不育系和其配套的保持系种子基因组DNA作为扩增模板，选用4对叶绿体DNA的SNPs标记，在4对SNPs的侧翼序列分别设计1对引物进行PCR扩增。扩增的PCR产物利用限制性内切酶酶切，通过不育系和保持系酶切产物长度不同进行鉴定。上述方法可以快速、准确地鉴定大豆细胞质雄性不育细胞质和正常可育细胞质；也可用于检测不育系（含有不育细胞质）繁殖过程中，混杂的保持系（含有可育细胞质），为保证大豆不育系种子生产过程中纯度要求提供保障。

主权项

一种叶绿体DNA的SNP标记鉴定大豆雄性不育细胞质的方法，包括以下步骤：提取含有雄性不育细胞质的大豆不育系和含有可育细胞质的保持系种子基因组DNA作为PCR扩增模板；选用3对叶绿体DNA的SNP标记，SNP名称代号分别为SNP1、SNP2和SNP4；在3对SNP的侧翼序列分别设计1对引物进行PCR扩增，所述的引物如下：其中SNP1对应的上游引物序列为5’‑TTGTGGCTCAGTCGCTAAATC‑3’，下游引物序列为5’‑TGTTAAACCGCCCATAAGAAC‑3’；其中SNP2对应的上游引物序列为5’‑TCTTTATCCTTGGGCAATGAGTT‑3’，下游引物序列为5’‑ATATTTAGGTTCGGGCATTTGT‑3’；其中SNP4对应的上游引物序列为5’‑GGGGATCCTTTATTAAATTAA‑3’，下游引物序列为5’‑ AATATGAAAATAAGAGCCTCC‑3’；SNP1、SNP2和SNP4扩增后的PCR产物分别利用限制性内切酶Bpu10Ⅰ、psiⅠ、EcoRⅠ进行酶切，酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，根据酶切片段长度进行鉴定。