一种快速测定特异位点DNA甲基化的方法

摘要

本发明涉及一种快速测定特异位点DNA甲基化的方法，该方法提供一种简便、快速测定特异位点CpG甲基化的方法，采用单碱基延伸引物末端标记荧光素核苷酸结合荧光偏振检测的特异CpG位点甲基化的方法。具有简便、快捷、高通量、低成本、无需分离纯化等优点，适合大量检测临床珍贵的低浓度DNA样本的甲基化。

主权项

一种检测目标生物样本中特定序列DNA的甲基化水平的方法，该方法包括以下步骤：步骤(1)，获取生物样本，并提取样本中的待测DNA片段；步骤(2)，用亚硫酸氢钠处理待测DNA，使待测DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶；步骤(3)，以步骤(2)处理完毕的DNA片段为模板DNA，以第一引物和第二引物分别从模板DNA两侧对模板DNA进行PCR扩增，所述第一引物和第二引物扩增的模板DNA片段应含有待测DNA片段的CpG位点；步骤(4)，碱性磷酸酶对步骤(3)的PCR产物进行消化处理，去除多余的第一引物、第二引物和dNTPs，并纯化回收；步骤(5)，分别取等量的步骤(4)纯化的PCR产物，在两个单独的反应体系中分别进行如下甲基化特异第三引物引导的单碱基延伸标记反应：反应一，使用荧光素dCTP用以检测目标CpG位点的甲基化；反应二，使用荧光素dUTP用以检测目标CpG位点的去甲基化；步骤(6)，根据步骤(5)反应产物dCTP荧光偏振值和dUTP荧光偏振值计算待测DNA甲基化水平。