从多潜能干细胞诱导胆碱能神经元的方法

摘要

本发明涉及从多潜能干细胞诱导胆碱能神经元的方法。首次揭示一种可诱导多潜能干细胞向基底前脑胆碱能神经元高效分化的方法，所述方法包括在合适的时间点进行悬浮培养或贴壁培养，采用联合骨形态发生蛋白9(BMP9)与Sonic hedgehog(Shh)诱导拟胚体使之分化为基底前脑胆碱能神经元。本发明的方法简单高效，获得含有高比例基底前脑胆碱能神经元的细胞群。

主权项

一种制备含基底前脑胆碱能神经元或其前体的细胞群的方法，包括：(1)培养多潜能干细胞，形成拟胚体；所述的多潜能干细胞是非人哺乳动物来源的；和(2)培养拟胚体，以骨形态发生蛋白9和音猬因子诱导；其中，培养拟胚体6±1天后以音猬因子诱导；培养拟胚体8±1天后以骨形态发生蛋白9诱导；所述的音猬因子的终浓度是300±200ng/ml；所述的骨形态发生蛋白9的终浓度是5‑10ng/ml；在加入骨形态发生蛋白9的2±1天后，收获细胞群，该细胞群为含基底前脑胆碱能神经元前体的细胞群；或在加入骨形态发生蛋白9后2±1后，进行单细胞贴壁培养，单细胞贴壁培养4±2天后收获细胞群，该细胞群为含基底前脑胆碱能神经元的细胞群。