一种伊乐藻组织培养与快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种伊乐藻组织培养与快速繁殖方法，其步骤是：A.外植体选择：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的植物茎作为外植体。B.外植体灭菌：用酒精和氯化汞处理外植体。C.芽诱导：选择最佳的激素配比诱导芽生长。D.增殖培养：调整激素配比和培养基浓度进行增殖培养。E.生根：选择合适的细胞生长素进行生根诱导。F.炼苗和移栽：在培养箱中打开瓶口培养两天，在转入自然水体中培养。该技术可以不受季节环境限制，培养出大量无菌苗，供水生生态系统恢复之用。

主权项

一种伊乐藻组织培养与快速繁殖方法，包括以下步骤：A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的带腋芽的伊乐藻茎段作为外植体，用碱性洗涤剂浸泡30min，再在自来水下冲洗2h，用蒸馏水反复冲洗4‑5次，用无菌水再反复清洗4‑5次，置于无菌操作台；B、外植体灭菌：在无菌操作台上首先用70%乙醇浸泡15s，用无菌水冲洗4‑5次，再用0.1%氯化汞进行表面消毒2‑5min，无菌水冲洗4‑5次，放入0.15%质量体积比的无菌柠檬酸溶液中切割，在无菌滤纸上将水吸干，待用；C、芽诱导：将形态及大小相似的1‑1.5cm的伊乐藻外植体接入芽诱导培养基，外植体上的芽经过了幼叶剥离处理，留下有2‑3幼叶包裹的生长点，于光照培养箱中静置培养，待幼芽长至1.0‑1.5cm可进行增殖培养；所述的芽诱导培养基为： MS固体培养基+KT 0.50‑2.0 mg/L+NAA  0.10‑0.50 mg/L +蔗糖浓度为3%，pH 5.8‑6.0；D、增殖培养：将长约1.0‑1.5cm的幼芽接入增殖培养基中，置于光照培养箱中静置，进行增殖培养，幼芽长至3‑4cm可进行生根；所述的增殖培养基为：1/2 MS液体培养基+KT 0.50‑2.00mg/L+ NAA  0.10‑0.50mg/L +蔗糖1.5%；每隔20‑25d继代一次，形成的幼芽，切成1.0‑1.5cm，转入增殖培养基，在与步骤D相同培养条件下继续进行增殖培养，扩繁植株；E、生根：将幼芽接入生根培养基中，置于光照培养箱中静置培养；所述的生根培养基为：1/2MS液体培养基+NAA 0.10‑0.50mg/L+蔗糖1.5%；F、炼苗和移栽：待不定根长至2.0以上时，打开瓶盖，室温下炼苗1‑2d后（打开瓶盖，静置在培养箱内即可），取出试管苗，洗净其根部培养基，移栽至自然水体中；步骤C,D,E均为无菌环境，光照60‑70μE/（m²·s），光照周期为12h/d，室内温度（22±2）℃。