| 主权项 |
从单细胞中得到编码免疫球蛋白可变结构域的核酸的方法，其包括以下步骤：‑用4至6条5'‑引物和1条3'‑引物进行第一个聚合酶链式反应，‑用13至15条5'‑引物和1条3'‑引物和第一个聚合酶链式反应的产物进行第二个聚合酶链式反应，其中在第二个聚合酶链式反应中，5’‑引物与第一个聚合酶链式反应中的相同但3’‑引物改变，或3’‑引物与第一个聚合酶链式反应中的相同但至少一条5’‑引物改变，和其中，当与待扩增的核酸结合时，相比在第一个聚合酶链式反应中的各5’‑引物的5’‑端和3’‑引物的3’‑端之间的核苷酸数目，在第二个聚合酶链式反应中的各5’‑引物的5’‑端和3’‑引物的3’‑端之间的核苷酸数目减少；其中a)为得到编码免疫球蛋白重链可变结构域的核酸，使用包含SEQ ID NO:05和/或06,07和/或08,09,10和/或11,12,13,和104和/或105和/或106的核酸的引物进行第一个聚合酶链式反应，和使用包含SEQ ID NO:128,129,130,131,132,133,134,135,136,137,138,139,140,141,和104和/或105和/或106的核酸的引物进行第二个聚合酶链式反应，b)为得到编码免疫球蛋白κ轻链可变结构域的核酸，使用包含SEQ ID NO:16,17,18,19,和115的核酸的引物进行第一个聚合酶链式反应，和使用包含SEQ ID NO:53和/或54,55和/或56,57和/或58,59,60,61和/或62,63和/或64,65,66,67,68,69,70,和115的核酸的引物进行第二个聚合酶链式反应，c)为得到编码免疫球蛋白λ轻链可变结构域的核酸，使用包含SEQ ID NO:21,22,23和/或24和/或25和/或26,和120和/或121和/或122和/或123和/或124和/或125的核酸的引物进行第一个聚合酶链式反应，和使用包含SEQ ID NO:72,SEQ ID NO:73和/或74,SEQ ID NO:75,SEQ ID NO:76,SEQ ID NO:77和/或78,SEQ ID NO:79,SEQ ID NO:80,SEQ ID NO:81,SEQ ID NO:82和/或83,SEQ ID NO:84和/或85,SEQ ID NO:86,SEQ ID NO:87和/或88,SEQ ID NO:89,SEQ ID NO:90和/或91,SEQ ID NO:92,和SEQ ID NO:120和/或121和/或122和/或123和/或124和/或125的核酸的引物进行第二个聚合酶链式反应。 |
