用于快速检测ATP的荧光共振体系的制备方法

摘要

用于快速检测ATP的荧光共振体系的制备方法，包括以下步骤：步骤一：准备一种Cy3荧光标记的ATP-aptamer适配体；步骤二：将QDs与ATP-aptamer适配体互补链进行偶联反应，得到QDs分子探针；步骤三：将步骤2得到的QDs分子探针与Cy3荧光标记的ATP适配体反应，得到ATP适配体与互补链相互作用后的用于检测ATP的荧光共振体系。本发明利用了ATP与其配体链(aptamer)特异性结合的特点，结合能量共振转移技术，实现了对ATP的快速检测，并且实现了对线粒体内ATP浓度变化的实时监控，为ATP的体外及体内检测监控提供了一种新的方法。

主权项

用于快速检测ATP的荧光共振体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：准备一种Cy3荧光标记的ATP‑aptamer适配体，ATP‑aptamer适配体为3’‑Cy3修饰的DNA适配体，浓度为0.2uM‑1uM，其序列信息为：5’‑ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT‑Cy3‑3’；步骤二：将QDs与ATP‑aptamer适配体互补链进行偶联反应，得到QDs‑分子探针，QDs为羧基表面水溶性量子点COOH‑QDs，浓度为1uM；ATP‑APTAMER适配体互补链为5’‑NH₂‑(CH₂)₁₂修饰的DNA，浓度为10‑500uM,其序列信息为：5’‑NH₂‑(CH₂)₁₂‑ACCTTCCTCCGCAATACTCCCCCAGGT‑3’；偶联反应方法制备如下：将COOH‑QDs加入到反应器中，300rpm，5min，震荡混匀；加入计算好用量的EDC溶液和sulfo‑NHS，10mg/mL，10mM硼酸盐缓冲液，pH7.4活化30min；加入计算好用量的DNAp，继续震荡混合均匀，300rpm，室温反应2h，当室温较低时，将搅拌式加热器的温度调至25℃，反应结束，用0.22μm针头式滤器将样品过滤，或者12000rpm离心3min除团聚；用超滤管将样品浓缩纯化5次，每次浓缩比不小于10，终产物QDs‑DNAp复溶于适当的目标偶联物缓冲液中；步骤三：将步骤二得到的QDs‑分子探针与Cy3荧光标记的ATP‑APTAMER适配体反应，得到ATP‑APTAMER适配体与互补链相互作用后的用于检测ATP的荧光共振体系。