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一种高产脂湿地松的离体快繁技术，其特征在于包括以下步骤： （1）外植体的消毒：选取完整、饱满、无一的湿地松种子，自来水搓洗干净，去掉种翅杂物，用0.1%～0.2%KMNO<sub>4</sub>溶液浸泡10～20min，无菌水冲洗3～5次后用2%～4%NaClO溶液消毒10～30min，无菌水冲洗干净后于无菌水中浸泡过夜,次日在超净工作台中将种子剥去种壳后以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒3～10min，再用无菌水清洗3～5次，无菌滤纸擦干后备用;（2）不定芽诱导：经步骤（1）处理后的种胚用无菌的手术器械小心使种胚与胚乳分离后，将种胚横置于芽诱导培养中进行不定芽诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养直至萌生一个不定芽，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至各不定芽伸长到1～2cm;（3）增殖培养：将步骤（2）成功诱导出的不定芽分离，以单个不定芽为单位转接到增殖培养基中进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～4天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养多次反复切割进行继代培养，以得到更多的丛生芽;（4）生根培养：将步骤（1）或步骤（2）培养得到的高度约为2～3cm的不定芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根;（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约5～7cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝3:1混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度,待幼苗成活后再移栽大田。 |
