发明名称 |
一种链特异性全基因组范围内研究APA的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种链特异性全基因组范围内研究APA的方法SS-3T-seq,该方法是用于在全基因组范围内研究APA变化,首先构建一种特殊的含有oligo dT的磁珠,用这种磁珠筛选含有多聚A的RNA,然后在磁珠上逆转录合成第一链cDNA,逆转录体系中用甲基化的dCTP替代正常的dCTP,然后用特殊的dNTP(dUTP代替dTTP)合成双链cDNA。经过断裂后磁珠上留下的即为含有APA位点的片段,再经过Gsu I酶切除去多聚A结构,将目的片段从磁珠上释放下来,两端经过修饰后添加Illumina测序接头,经过片段大小筛选,USER酶处理以除去第二链中dUTP,只剩余第一链做PCR扩增,即得到可用于Illumina二代测序的含有链的信息的文库。本方法实验操作简单,降低了步骤繁琐引起的损失,同时降低了实验难度和造价,非常适合推广。 |
申请公布号 |
CN104673785A |
申请公布日期 |
2015.06.03 |
申请号 |
CN201510076248.0 |
申请日期 |
2015.02.12 |
申请人 |
上海交通大学 |
发明人 |
赵小东;邵志峰;康亚妮;陈健 |
分类号 |
C12N15/10(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/10(2006.01)I |
代理机构 |
上海旭诚知识产权代理有限公司 31220 |
代理人 |
郑立 |
主权项 |
一种链特异性全基因组范围内研究APA的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)构建一种特殊的含有oligo dT的磁珠,用这种磁珠筛选含有多聚A的RNA,所述磁珠既能筛选含有多聚A的RNA,同时又含有酶切位点移除文库中的多聚A结构;(2)在磁珠上逆转录合成第一链cDNA,逆转录体系中用甲基化的dCTP替代正常的dCTP;(3)用特殊的dNTP合成双链cDNA,所述特殊的dNTP是指其中用dUTP代替dTTP,经过断裂后磁珠上留下的即为含有APA位点的片段;(4)再经过Gsu I酶切除去多聚A结构,将目的片段从磁珠上释放下来;(5)目的片段两端经过修饰后添加Illumina测序接头;(6)经过片段大小筛选后,用USER酶处理以除去第二链中的dUTP,只剩余第一链做PCR扩增,即得到用于Illumina二代测序的文库。 |
地址 |
200240 上海市闵行区东川路800号 |