一种球子蕨无菌繁殖技术

摘要

本发明公开了一种球子蕨无菌繁殖技术，球子蕨（Onoclea sensibilis L.）为球子蕨科球子蕨属植物，中型的陆生蕨类。随着蕨类植物逐渐受到人们的关注，市场需求量日益增加，在自然条件下蕨类植物主要通过孢子和根莲进行繁殖，存在繁殖系数低、周期长等缺点，不利于球子蕨的市场化生产。目前，关于球子蕨的无菌繁殖技术尚未有相关报道，本发明以球子蕨孢子为外植体，经过孢子萌发、愈伤组织诱导、丛生芽分化及生根等过程获得了球子蕨离体再植株，建立球子蕨的无菌繁殖技术体系，以促进球子蕨的规模化生产。

主权项

一种球子蕨无菌繁殖技术，其特征在于包括以下步骤：（1）孢子消毒：将孢子置于1.5mL(或2mL)离心管中,蒸馏水浸泡1～3h，以4000r/min速度离心5～10min，去上清液,加入3%～5%的次氯酸钠溶液进行消毒5～15min，再4000r/min速度离心5～10min，去上液，用无菌水冲洗4～5次，加无菌蒸馏水配制成浓度约为6000个/mL的孢子悬浮液备用;（2）孢子萌发培养：取经步骤（1）处理后的孢子悬浮液0.5mL接种于萌发培养基中进行孢子萌发培养,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～4000lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养20天后统计孢子萌发率；（3）愈伤组织诱导培养：将步骤（2）萌发培养得到的单个原叶体茎接种到诱导培养基进行愈伤组织诱导,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～4000lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养40天后统计愈伤组织诱导情况;（4）丛生芽诱导及增殖：将步骤（3）诱导出的愈伤组织切割成大小（3mm×3mm）一致的团块并接种到分化培养基中进行丛生芽诱导和增殖,接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～4000lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养40天后统计丛生芽分化情况;（5）生根培养：将步骤（4）诱导出的丛生芽切割成单芽后接种至生根培养基中进行诱导生根，接种后置于每天光照12～14小时，光照强度为2000～4000lx，置于培养温度为23～25℃，空气相对湿度为75%～80%的条件下培养30天后统计生根情况;（6）炼苗移栽：当孢子体苗根长到约2cm、茎高约3cm时,将培养瓶瓶盖打开,在通风处炼苗3～5天，取出生根苗,洗去根部培养基,移栽到经过高温灭菌的由草炭：蛭石＝1:1的混合成的基质中,覆盖保鲜膜保持一定湿度,1周后揭膜，移栽20天后统计成活率。