一类超分子水凝胶纳米材料及凝胶因子前体及其制法

摘要

本发明公开了一类碘原子标记的超分子水凝胶纳米材料及酶敏感凝胶因子前体及其制备方法，特征是通过固相多肽合成反应合成碘原子标记的凝胶因子前体，通过加入碱式磷酸酶进行恒温孵育的方式控制成胶，能够直观地显示牛小肠来源的碱式磷酸酶的活性。与传统的超分子水凝胶纳米材料相比，本发明的碘原子标记的超分子水凝胶纳米材料的优势在于凝胶因子合成简单，成胶条件容易控制；由于凝胶因子前体标记有碘原子，碘原子作为重原子能够有效吸收X射线，成胶部位较其他部位对X射线的吸收更为明显，从而适应在不同体系内显示磷酸酶的分布区域。本发明填补了重原子标记的超分子水凝胶材料及酶敏感凝胶因子前体及其制备方法方面的空白。

主权项

一类碘原子标记的超分子水凝胶纳米材料的酶敏感凝胶因子前体的制备方法，其特征在于：先分别合成两段寡肽序列，按：将1毫摩尔2‑氯三苯甲基氯树脂在2‑3毫升N，N‑二甲基甲酰胺里溶胀4‑8分钟后，加入2毫摩尔N‑芴甲氧羰基‑O‑磷酸基‑L‑酪氨酸，再加入2毫摩尔N，N‑二异丙基乙胺，反应2‑3小时后，用100微升甲醇反应5‑10分钟，切去酪氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第二个氨基酸N‑芴甲氧羰基‑L‑4‑碘苯丙氨酸反应2‑3小时，切去苯丙氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第三个氨基酸N‑芴甲氧羰基‑L‑苯丙氨酸反应2‑3小时，切去苯丙氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔2‑萘乙酸反应2‑3小时，最后用体积浓度为1％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液从该树脂上切下合成的肽段，用乙醚使其沉淀析出，冷冻离心并倾倒除去上层乙醚，乙醚挥发干后所得白色固体粉末即为萘乙酸修饰的磷酸化寡肽序列——萘乙酸‑苯丙氨酸‑4‑碘苯丙氨酸‑酪氨酸‑O‑磷酸基，经过高效液相色谱分离提纯，收集在紫外波段226纳米及268纳米处有特征吸收的主要组分，即为第一种纯化合物P₁；再按：将1毫摩尔2‑氯三苯甲基氯树脂在2‑3毫升N，N‑二甲基甲酰胺里溶胀4‑8分钟后，加入2毫摩尔N‑芴甲氧羰基‑O‑磷酸基‑L‑酪氨酸，再加入2毫摩尔N，N‑二异丙基乙胺，反应2‑3小时后，用100微升甲醇反应5‑10分钟，切去酪氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第二个氨基酸N‑芴甲氧羰基‑L‑苯丙氨酸反应2‑3小时，切去苯丙氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔第三个氨基酸N‑芴甲氧羰基‑L‑苯丙氨酸反应2‑3小时，切去苯丙氨酸的保护基，加入活化的1.6毫摩尔2‑萘乙酸反应2‑3小时，最后用体积浓度为1％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液从该树脂上切下合成的肽段，用乙醚使其沉淀析出，冷冻离心并倾倒除去上层乙醚，乙醚挥发干后所得白色固体粉末即为萘乙酸修饰的磷酸化寡肽序列——萘乙酸‑苯丙氨酸‑苯丙氨酸‑酪氨酸‑O‑磷酸基，经过高效液相色谱分离提纯，收集在紫外波段226纳米及268纳米处有特征吸收的主要组分，即为第二种纯化合物P₂；其中固相肽合成所用的氨基酸都是以9‑芴甲氧羰基作为α‑氨基保护基，而酪氨酸的侧链酚羟基由磷酸基修饰；其中活化氨基酸的试剂是与氨基酸等摩尔量的1‑羟基苯并三唑和苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸盐，切除9‑芴甲氧羰基的试剂是体积浓度为20％的哌啶的N，N‑二甲基甲酰胺溶液；在每接上一个氨基酸和切去9‑芴甲氧羰基保护基时，都采用凯撒测试试剂检测氨基存在与否：若阳性，显蓝色，即表明已脱除9‑芴甲氧羰基保护基；若阴性，显黄色，则表明氨基酸已接上。