一种固定化琼胶酶制备琼胶寡糖的方法

摘要

本发明公开了一种固定化琼胶酶制备琼胶寡糖的方法，步骤如下：首先利用共沉淀法制备出油酸包埋的磁性Fe₃O₄纳米粒子，加入KMnO₄溶液对该纳米粒子进行氧化，制备出羧基功能化磁性Fe₃O₄纳米粒子，再将羧基功能化磁性Fe₃O₄纳米粒子与偶联剂戊二醛进行反应，反应时间2h，戊二醛浓度4%，磁分离去除清洗液后加入酶液进行固定，固定化时间1h，固定化温度4℃，加酶量1mL(850U)，制备得到固定化琼胶酶，然后在振荡的条件下，将溶于反应介质中的琼胶与固定化酶进行酶解反应，反应结束后通过磁分离得到新琼寡糖及回收固定化酶。本发明固定化工艺简单，操作成本低，酶活回收率良好，固定化酶稳定性好，可重复利用，产物易分离，适应于规模化生产。

主权项

一种固定化琼胶酶制备琼胶寡糖的方法，其特征于：步骤如下：步骤一、固定化载体的制备：利用共沉淀法制备油酸包埋的磁性Fe₃O₄纳米粒子，即Fe³⁺与Fe²⁺在加入氨水的条件下反应，在反应过程中加入油酸对其进行包埋，制备磁性Fe₃O₄纳米粒子，然后加入KMnO₄溶液对制备好的油酸包埋的磁性Fe₃O₄纳米粒子进行氧化，制得羧基功能化的磁性Fe₃O₄纳米粒子；步骤二、固定化酶的制备：将步骤一制备的羧基功能化的磁性Fe₃O₄纳米粒子与浓度为4%的戊二醛进行交联反应2h，反应结束用磷酸盐缓冲清洗3次，磁分离得到活化的羧基功能化的磁性Fe₃O₄纳米粒子，然后加入酶液进行固定化，加酶量为42.5U/g载体，固定化温度为4℃，固定化时间1h，制得固定化琼胶酶；步骤三、琼胶寡糖的制备：在振荡的条件下，将步骤二制备的固定化琼胶酶加入到浓度为0.2%的琼胶溶液中进行酶解反应，反应温度40℃，pH7.0，振荡10min，反应结束后，通过磁分离回收固定化琼胶酶，即制得琼胶寡糖。