从糖蜜中提取生物素的方法及其薄层层析扫描检测方法

摘要

本发明公开了一种从糖蜜中提取生物素的方法，以糖蜜和硅藻土为原料，经甲醇提取，N,N-二甲基甲酰胺提取，无水乙醇洗涤除杂，丙酮除杂，氯仿除杂，乙酸丁酯和环己烷提取除杂，最终得到含生物素的样品液。本发明还提供了一种生物素的薄层层析扫描检测方法，(1)取待检测样品液，点在硅胶板上，向展开缸加入展开剂，在展开缸内展开，然后将薄层板拿出放在通风柜中晾干；(2)展完后晾干的展板，用染色液喷雾染色，得到与背景对比明显的标准品的斑点和样品的斑点；(3)利用薄层扫描仪以530nm吸收波长进行薄层层析扫描，计算出样品液中生物素的质量浓度。具有简单、快速、准确、可靠、稳定等优点。

主权项

一种从糖蜜中提取生物素的方法，其特征在于：步骤如下：(1)以糖蜜和硅藻土为原料制得糖蜜硅藻土粉：取糖蜜和硅藻土，混合混匀，烘干，得糖蜜硅藻土粉；其中，糖蜜和硅藻土的重量比为3：1～3；(2)向糖蜜硅藻土粉中加入甲醇，搅拌提取30～60min，过滤得滤渣；所述甲醇的加入量为：每1克糖蜜硅藻土粉加入3～5ml甲醇；(3)向上述滤渣中加入N,N‑二甲基甲酰胺，在水浴70～100℃下搅拌提取1～2小时，过滤得上清液和滤渣；滤渣用无水乙醇洗涤1～3次，得乙醇洗涤液；所述N,N‑二甲基甲酰胺的加入量为：每1克滤渣加入4～6mlN,N‑二甲基甲酰胺；所述无水乙醇的加入量为：每次洗涤所用无水乙醇的量为N,N‑二甲基甲酰胺体积的0.8～1.2倍；(4)合并步骤(3)所得上清液和乙醇洗涤液，蒸发浓缩，加入3～5倍量的丙酮，静置，过滤除去沉淀，再次蒸发浓缩，加入3～5倍量的丙酮，静置，过滤除去沉淀，再次蒸发浓缩，加入3～5倍量的氯仿，静置，过滤除去沉淀，得提取液；(5)向提取液中加入乙酸丁酯和环己烷，乙酸丁酯、环己烷的加入量与提取液的体积相同，静置分层；取上清液，即为生物素溶液。