检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的引物、方法和试剂盒

摘要

本发明提供了检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的引物及检测方法和试剂盒，所述引物的序列为：CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAA；CAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。采用本发明的引物序列对待检样本中的ERβ基因进行扩增，并结合Sanger测序技术，能对人类雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列多态性进行检测，特异性好，准确度高，扩增和测序的稳定性好。

主权项

检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的引物，其特征在于：所述引物的序列为：CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAACAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG；所述引物还包括测序引物，所述测序引物为：CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAACAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG；用上述序列检测雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的包括以下步骤：(1) 取全血样本，加入红细胞裂解液，裂解红细胞；(2) 加入核酸提取液，提取核酸；(3) 加入PCR扩增反应液进行DNA扩增；PCR扩增的引物序列为：CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAACAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG；扩增反应条件为：95℃ 5分钟；98℃ 10秒、56℃ 20秒、68℃ 30秒，40个循环；68℃ 2分钟；(4) 取PCR 扩增产物进行琼脂糖电泳，检测是否扩增成功，选取有目的条带的PCR扩增产物进行酶纯化反应；所述酶纯化反应为：取扩增好的PCR产物加入酶纯化液中，反应条件为：37℃ 50分钟，95℃ 5分钟；(5) 采用Sanger测序法对酶纯化产物进行测序，检测出被检样本中雌激素受体β基因第5内含子CA重复序列的重复次数；测序反应条件为：95℃ 4分钟，95℃15秒；50℃ 20秒；60℃ 2分钟，25个循环；Sanger测序的引物序列为：CAF：CCTTCAAGATAACCACCGAACAR：GGTCAGGAGTTCGAGACAAG。