一种小鼠Loxl3基因条件性敲除的方法与应用

摘要

本发明涉及一种小鼠Loxl3基因条件性敲除的方法与应用，该方法利用在Loxl3基因关键外显子两端添加Cre重组酶靶向序列loxP位点，构建条件性基因敲除载体，转染胚胎干细胞(ES细胞)，再进行显微注射制作可用于条件型基因敲除的floxed小鼠，再与相应组织特异性的Cre小鼠交配，可获得能在特定组织敲除Loxl3基因的小鼠。该方法制得小鼠作为腭裂疾病发病研究的模型鼠，有利于详细阐明Loxl3基因在组织中的功能以及对胚胎发育调控的机理中的作用。同时该小鼠还可以作为研究Loxl3基因功能的动物模型，具有重要的应用价值。

主权项

一种小鼠Loxl3基因条件性敲除的方法，其特征在于，出生后纯合敲除小鼠表现腭裂症状，包括如下步骤：构建Loxl3条件性基因敲除的重组载体，线性化重组载体并转染胚胎干细胞，筛选发生同源重组的胚胎干细胞克隆，将筛选出的发生同源重组的胚胎干细胞克隆显微注入C57BL/6供体小鼠的囊胚，将含有阳性胚胎干细胞的囊胚移植到假孕小鼠的子宫，生产出嵌合体小鼠，嵌合体小鼠与C57BL/6小鼠回交生出杂合子小鼠，将该杂合子小鼠与全身性表达Cre酶的EIIa‑Cre小鼠交配，获得双杂合的小鼠，雌性和雄性双杂合小鼠互交，从后代中获得具有腭裂表型的纯合基因敲除小鼠。