一种非O157产志贺毒素大肠杆菌的高效检测方法

摘要

本发明涉及一种非O157产志贺毒素大肠杆菌的高效检测方法。该方法包括样品的采集、样品的前增菌、二重PCR的鉴定、非O157STEC分离、多重PCR鉴定以及O抗原、H抗原的测定步骤。本发明大大提高了前增菌的初筛率，并且大大减少了检测时间，简化了繁琐的操作步骤，节省了大量的人力物力，同时减少了因繁琐操作带来的人为因素而造成的偏差。

主权项

一种非O157产志贺毒素大肠杆菌的高效检测方法，包括以下步骤：(1)样品的采集(2)样品的前增菌：将采集的样品进行前增培养；(3)二重PCR的鉴定：取培养物以煮沸法制得的DNA为模板，进行毒力基因stx1和stx2的二重PCR检测，剩余的培养物放置4℃冰箱保存；(4)非O157STEC分离：将步骤3中stx1和/或stx2阳性的样品进行非O157STEC分离；(5)多重PCR鉴定：步骤(4)中PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，stx1和/或stx2阳性的样品再进行毒力基因stx1、stx2、eaeA、ehxA的四重PCR检测；(6)O抗原的测定：步骤(5)中四重PCR检测的阳性样品于121℃，2h高压破坏荚膜，暴露O抗原；取1ml菌液离心12000r/min，5min，弃上清，加5％石炭酸生理盐水重悬；利用玻板、试管凝集试验测定O抗原。