一种过水解酶固定化酶制剂的制备方法

摘要

本发明涉及酶制剂制备技术，具体涉及一种过水解酶的固定化酶制剂的制备方法。其技术方案是：诱导大肠杆菌重组菌株表达过水解酶后，经裂解、纯化、浓缩得到浓度为10～18g/L的过水解酶蛋白；将过水解酶蛋白与牛血清白蛋白混合，加入乙二醇二甲醚溶液，沉淀后向上述沉淀体系中进一步加入戊二醛，摇床震荡获得过水解酶的交联酶聚集体；将交联酶聚集体与聚乙烯醇混合后立即将其滴加到硝酸钠溶液中获得片状过水解酶固定化酶制剂，冻干保存。本发明制备方法简单方便，价格低廉，具备市场竞争优势；制备的固定化酶制剂，对印染废水进行脱色处理，在脱色率超过80%的情况下可以循环利用6次以上，具有良好的应用效果。

主权项

一种过水解酶的固定化酶制剂的制备方法， 其特征在于：配方过水解酶蛋白                              4 g牛血清白蛋白                          0.1～2 g乙二醇二甲醚                     400～3600 mL戊二醛                              30～80 mL聚乙烯醇                            100～200 g硝酸钠                                    50 g;制备（1）诱导大肠杆菌重组菌株表达过水解酶后，裂解大肠杆菌制备过水解酶粗酶液；经亲和色谱柱纯化过水解酶粗酶液，制备电泳纯的过水解酶蛋白质样品；浓缩过水解酶蛋白质样品；（2）将过水解酶蛋白与牛血清白蛋白均匀混合成混合蛋白液；加入乙二醇二甲醚溶液，混匀后室温下沉淀；向上述沉淀体系进一步加入戊二醛至体系终浓度为25～200 mmol/L，室温下摇床上震荡获得过水解酶的交联酶聚集体；（3）离心收集过水解酶的交联酶聚集体，洗涤后与质量浓度为6～20%的聚乙烯醇混合均匀进行包埋，然后立即将其滴加到质量浓度为10～80%的硝酸钠溶液中，3～4小时后稳定固定化酶的形态，获得片状过水解酶固定化酶制剂。