基于多功能化氮化碳材料的肿瘤标志物电化学发光免疫传感器的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了基于多功能化氮化碳材料的肿瘤标志物电化学发光免疫传感器的制备方法及其应用，特点是包括将三聚氰胺加热真空干燥后得到氮化碳粉末，然后加硝酸反应得到羧基化的氮化碳，然后依次加入偶联试剂、肿瘤标志物抗体和氨基化的纳米四氧化三铁悬浊液得到多功能化氮化碳材料步骤；最后将多功能化氮化碳材料溶液滴在磁性玻碳电极表面得到用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器的步骤，该传感器可用于检测待测样品中肿瘤标志物的浓度，优点是特异性好、灵敏度高、结果准确可靠、成本低、快速，且制备过程极其简单。

主权项

一种基于多功能化氮化碳材料的肿瘤标志物电化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于具体步骤如下：（1）多功能化氮化碳材料的制备a. 将三聚氰胺在500～600℃下加热3～5 h，真空干燥后得到氮化碳粉末；b. 取0.8～1.5 g 氮化碳粉末加入到80～120 mL 4～6 mol/L HNO₃中，于120～150℃下回流24～48小时后，自然冷却至室温，水洗涤至pH=7，离心，将沉淀在35～40℃下真空干燥12～20小时，得到羧基化的氮化碳；c. 取0.2～0.5 g FeCl₂·4H₂O和0.6～1.0 g FeCl₃·6H₂O溶于50～100 mL除氧的二次水中，然后在氮气氛保护下逐滴加入到三口烧瓶中，磁力搅拌使其充分混合均匀，然后将25wt%～28wt%的氨水逐滴缓慢加入到三口烧瓶中直至溶液的pH为8.0～10.0，将三口烧瓶内的溶液加热到70～100℃后，于70～100℃搅拌回流1～3 h，然后停止加热在氮气氛保护下搅拌回流冷却至室温，得到黑色沉淀物纳米四氧化三铁；将纳米四氧化三铁用水清洗至中性，定容至50 mL，超声30 min～1 h后，加入0.1～0.2 mL 3‑氨丙基三乙氧基硅烷，室温下搅拌 6～8 h，得到氨基化的纳米四氧化三铁悬浊液；d. 取150～250 µL 0.5～1.5 mg/mL羧基化的氮化碳加入150～250 µL偶联试剂后，用0.8～1.2 mol/L盐酸调pH为4.0～6.0，振摇 1～2 h，离心取沉淀加水洗涤后，再离心取沉淀加水洗涤，再次离心取沉淀加水洗涤后定容至200～300 µL，用0.1～0.2 mol/L NaOH溶液调pH为8.0～10.0，然后加入50～100 µL 0.1～1 µg/mL肿瘤标志物抗体溶液，摇床孵育1～2 h后再加入150～250 µL氨基化的纳米四氧化三铁悬浊液，继续孵育3～5 h，再加入50～100 µL 2%牛血清白蛋白溶液以封闭非特异性吸附位点，继续孵育1～2 h，用磁铁吸引分离，水清洗至中性后，定容至100～200 µL，即得到多功能化氮化碳材料溶液；（2）电化学发光免疫传感器的组装a. 将直径为3～5 mm的磁性玻碳电极依次用1.0、0.3和0.05 μm的Al₂O₃抛光粉在麂皮上抛光至镜面，超声清洗2 min，然后依次用乙醇水溶液、硝酸水溶液和蒸馏水超声清洗；b. 取5～10 µL步骤（1）所得的多功能化氮化碳材料溶液，滴在磁性玻碳电极表面，多功能化氮化碳材料，即得到用于检测肿瘤标志物的电化学发光免疫传感器。