一种适配体功能化磁性纳米材料吸附双酚A检测回收率的方法

摘要

本发明公开一种基于适配体功能化磁性纳米材料检测双酚A的方法，属于食品安全检测领域，用于牛奶、瓶装矿泉水等中双酚A含量的检测。本发明用双酚A特异核酸适配体功能化磁性纳米材料，利用其磁分离样品的富集效应，让样品中的目标物能够快速浓缩，可以提高检测灵敏度。同时结合高效液相与荧光检测的高灵敏度的特点，通过磁分离，将磁纳米粒子吸附后的洗脱液通过高效液相色谱测定其回收率。

主权项

一种适配体功能化磁性纳米材料磁分离双酚A的方法，其特征在于：磁纳米粒子的合成、适配体功能化的磁纳米粒子、适配体功能化的磁性生物传感器吸附目标物双酚A，并洗脱后通过高效液相检测；具体步骤为：(1)100nm磁纳米粒子的合成100nm的磁性纳米材料(Fe₃O₄)采用水热法合成；准确称取2g六水合物氯化铁和4.8g乙酸钠溶于60mL乙二醇中，然后加入1.5g聚乙二醇在机械搅拌器作用下充分搅拌2h，将黄色液体全部转移至带有聚四氟乙烯内胆(100mL)的密闭不锈钢水热反应釜中，在210℃油浴锅中加热反应12h；反应完成后将得到的黑色物质用无水乙醇重复洗6次，置于室温下真空干燥；(2)适配体功能化磁纳米粒子的制备准确称取0.3g Fe₃O₄溶于0.1M盐酸(100mL)，超声10分钟，再用去离子水洗涤5次，磁铁分离，将Fe₃O₄均匀分散在150mL溶剂中(乙醇：超纯水，4：1)，并加入1.5mL氨水(质量分数28％)，随后加入硅酸乙酯3mL，在20℃下快速搅拌16小时，用乙醇和水洗涤Fe₃O₄@SiO₂，真空干燥；取5mL二氧化硅包裹的磁纳米粒子，加入30mL无水乙醇，5mL 3‑氨丙基3‑乙氧基硅烷(APTES)；60℃加热搅拌，反应6h；冷却至室温后，磁铁分离，无水乙醇洗涤3次后最终分散于5mL无水乙醇中备用；将氨基化后的Fe₃O₄@SiO₂硅包磁纳米粒子重悬在超纯水中(5mg/mL)，与过量的EDC(200mM)和NHS(100mM)在室温下孵育30min，然后通过磁分离除去残留的EDC和NHS；取10μM DNA与活化的硅包磁纳米粒子反应6h；然后将MNP‑DNA用去离子水洗涤4次，重悬在超纯水中储存在4℃下备用；(3)适配体吸附目的物200μL MNP‑DNA探针溶液置入2mL离心管中，然后加入800μL(10pg/mL‑100ng/mL)的标样，室温下孵育2小时，磁铁分离；(4)目标物洗脱将上述经过磁分离后的适配体功能化磁纳米粒子于甲醇溶剂中在60℃下洗脱1小时，保留洗脱液；将再生后的适配体功能化磁纳米粒子重复步骤(3)和(4)3‑5次，收集洗脱液；(5)高效液相检测将上述步骤中分离出的洗脱液通过高效液相检测；高效液相色谱测定条件：色谱柱：C₁₈柱；流动相：甲醇‑水(70+30)；流速：1mL/min；柱温：室温；荧光检测器：激发波长227nm，发射波长313nm。