Ingeniería de sistemas, métodos y composiciones de guía optimizadas para manipulación de secuencias

摘要

Una composición de origen no natural u obtenida por ingeniería que comprende: una secuencia de polinucleótidos de ARN quimérico (ARNchi) del sistema de Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente Espaciadas (CRISPR)-(Cas) asociado a CRISPR (CRISPR-Cas), en donde la secuencia de polinucleótidos comprende (a) una secuencia guía con entre 10 - 30 nucleótidos de longitud, capaz de hibridarse a una secuencia diana en una célula eucariota, (b) una secuencia de emparejamiento de tracr, y (c) una secuencia de ARNtracr en la que (a), (b) y (c) se colocan en una orientación de 5' a 3', en la que cuando se transcribe, la secuencia de emparejamiento de tracr se hibrida a la secuencia de ARNtracr y la secuencia guía dirige la unión específica de secuencias de un complejo de CRISPR a la secuencia diana, en la que el complejo de CRISPR comprende una proteína Cas9 de Tipo II que forma complejo con (1) la secuencia guía que se hibrida a la secuencia diana, y (2) la secuencia de emparejamiento de tracr que se hibrida a la secuencia de ARNtracr, en la que la secuencia de ARNtracr tiene una longitud de 50 o más nucleótidos.