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一种自大肠杆菌(E.coli)K5制备实质上纯肝素前体(heparosan)之方法，其包含：(a)大肠杆菌K5于葡萄糖作为主要碳源之限定培养基中培养，其中该培养系由批次生长阶段及批次补料生长阶段组成，其中(i)用于该批次生长阶段之培养基包含(每公升)约20g葡萄糖、10至300mg硫胺素、约13.5g KH2PO4、约4.0g (NH4)2HPO4、约1.4g MgSO4．7H2O、约1.7g柠檬酸、及约10.0mL微量金属溶液；其中该微量金属溶液基本上由(每公升5M HCl)10.0g FeSO4．7H2O、2.0g CaCl2、2.2g ZnSO4．7H2O、0.5g MnSO4．4H2O、1.0g CuSO4．5H2O、0.1g (NH4)6Mo7O24．4H2O、及0.02g Na2B4O7．10H2O组成，及其中；(ii)用于该批次补料生长阶段之进料培养基系由(每公升)250至1000g葡萄糖、20g MgSO4、0.15-0.5g硫胺素及含或不含47g KH2PO4组成，及(iii)其中藉由补充或未补充氧气之喷布空气(sparged air)提供氧气；(b)将肝素前体结合至固相，随后洗脱；及(c)自该洗脱液沈淀肝素前体；其中该实质上纯肝素前体之纯度至少90%。 |
