一种用于转基因大豆检测的五基因标准质粒分子及其构建

摘要

本发明公开了一种转基因作物检测中必要的标准质粒分子及其构建方法。一种转基因大豆检测用标准质粒分子及其构建方法，所述标准质粒分子包含大豆内源基因Lectin特异性片段、35S启动子和NOS终止子特异性片段、转基因大豆品系A2704-12中外源基因PAT特异性片段、转基因大豆GTS40-3-2品系中外源基因EPSPS特异性片段。通过分析这五个基因的特异性序列，设计了特异性PCR引物扩增获得了五个目的基因片段。通过融合PCR方法将这五个基因融合成一个长片段，克隆到质粒载体pMDTM19-T Simple上得到重组质粒分子pTLE5。本发明中构建的标准质粒分子完全可以代替阳性标准品，该标准质粒分子完全适用于对转基因大豆品系GTS40-3-2和转基因大豆品系A2704-12的筛选、结构基因特异性的定性和定量PCR分析和检测。如有新的转基因材料出现，可在原标准分子的基础上加入新的外源基因片段，满足日益增多的转基因作物材料的检测需要。

主权项

一种转基因大豆检测用标准质粒分子，其特征在于，通过特异性PCR引物从转基因大豆基因组DNA中扩增出大豆内源基因Lectin 1、筛选序列35S启动子和NOS终止子、外源基因PAT和EPSPS基因，利用融合PCR将这五个基因融合成一个片段，并一次构建到质粒载体pMD^TM19‑T Simple中，获得标准质粒分子pTLE5，其分子大小为5368bp；标准分子中5个基因的引物序列和产物大小如下：。