发明名称 |
一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用 |
摘要 |
本发明提供一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法及应用,将氨基化的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠分散到Tris缓冲溶液中与癌症标志物抗体(Ab1)相连后作为易分离的免疫探针;中空聚多巴胺-金纳米材料(PDA-Au)分散到Tris缓冲溶液中与癌症标志物抗体(Ab2)相连作为免疫识别物质。Ab1与Ab2与对应癌症标志抗原特异性结合构成三明治夹心免疫体系。通过磁性将该免疫体系分离出来,随后加入到对硝基苯酚与硼氢化钠的混合水溶液中,通过紫外可见仪进行测定。本发明制备得到的纳米金复合材料免疫传感器免疫检测线性范围为0~100U/mL,检测下限达0.05U/mL,相关系数达0.998。 |
申请公布号 |
CN104634973A |
申请公布日期 |
2015.05.20 |
申请号 |
CN201510071326.8 |
申请日期 |
2015.02.11 |
申请人 |
曲阜师范大学 |
发明人 |
渠凤丽;赵岩 |
分类号 |
G01N33/574(2006.01)I;G01N33/531(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/574(2006.01)I |
代理机构 |
济南泉城专利商标事务所 37218 |
代理人 |
李桂存 |
主权项 |
一种纳米金复合材料免疫传感器的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)制备氨基化的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠 将直径为200~250nm的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠分散到水中,Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠浓度为0.2~0.8mg/mL水,然后按浓度为0.1~0.4μL/mL水加入3‑氨丙基三乙氧基硅烷,混合均匀,于15~25℃搅拌3~12h,得到氨基化的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠;(2)制备中空聚多巴胺‑金纳米材料a)将直径为200~250nm的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠加入到pH为8.5的Tris缓冲溶液中,配制成1.0~2.0mg/mL Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠的Tris分散液,然后加入多巴胺盐酸盐,Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠与多巴胺盐酸盐的质量比为1:0.8~1.2,混合均匀,于15~25℃搅拌反应3~24h,磁分离,得Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑聚多巴胺纳米颗粒;b)将Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑聚多巴胺纳米颗粒配制成浓度为0.05~0.1mg/mL的溶液,然后加入质量分数为1%的HAuCl<sub>4</sub>水溶液,Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑聚多巴胺与HAuCl<sub>4</sub>水溶液的体积比为150~250:1,混合均匀,于80~100℃搅拌反应20~40 min,磁分离,得Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑聚多巴胺‑Au纳米材料;c)将Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑聚多巴胺‑Au纳米材料配制成浓度为1.5~2.5mg/mL的溶液,加入浓度为5.5~6.5mol/L的盐酸水溶液1.5~2.5mL,于15~25℃搅拌反应5~8h,得中空聚多巴胺‑纳米金材料;(3)制备免疫传感器a)将步骤(1)制备的氨基化的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中,配制成浓度为0.5~2.0mg/mL的分散液,按分散液与戊二醛水溶液的体积比0.5~2.0:1加入浓度为2.5wt%的戊二醛水溶液,于15~25℃搅拌反应3~12h,得到功能化Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠,将功能化Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠磁分离后重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中,配制成浓度为0.5~1.5mg/mL的分散液,加入浓度为2μg/mL的癌症标志物抗体,即一抗/Ab1,功能化Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠分散液与一抗/Ab1的体积比为5~20:1,37℃下震荡0.5~2h,随后加入浓度为1wt%的BSA用以封闭非特异性结合位点,功能化Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>纳米磁珠分散液与加入的BSA的体积比为0.5~2:1,37℃下震荡10~60min后磁分离,随后加入pH为7.2的Tris缓冲溶液混合均匀,再次磁分离,将其重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中,配制成质量浓度为0.5~2.0mg/mL的分散液,然后向上述分散液中加入质量浓度为1mg/mL的NaBH<sub>3</sub>CN水溶液,加入的NaBH<sub>3</sub>CN水溶液与上述分散液的体积比为0.5~2:1,然后于37℃震荡10~60min,得到Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1;b)将上步得到的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中配制成浓度为0.5~1.5mg/mL的分散液,加入到从0 U/mL到100 U/mL的不同浓度的癌症标志物的抗原中,其中Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1分散液与相对应的癌症标志物的抗原的体积比为0.5~2:1,37℃震荡10~60min,得到Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1‑癌标;c)将步骤(2)制得的中空聚多巴胺‑纳米金材料分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中配制成浓度为0.5~2.0mg/mL的中空聚多巴胺‑纳米金分散液,然后加入浓度为2μg/mL的癌症标志物抗体,即二抗/Ab2,中空聚多巴胺‑纳米金分散液与二抗/Ab2的体积比为5~20:1,37℃下震荡0.5~2h,随后按中空聚多巴胺‑纳米金分散液与BSA的体积比为0.5~2:1加入浓度为1wt%的BSA用以封闭非特异性结合位点,37℃下震荡10~60min,离心分离,将分离出的固体重新分散到pH为7.2的Tris缓冲溶液中,配制成浓度为0.5~2.0mg/mL的中空聚多巴胺‑纳米金溶液,然后按中空聚多巴胺‑纳米金分散液与Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1‑癌标的体积比为0.5~2:1加入浓度为0.5~2.0mg/mL的Fe<sub>3</sub>O<sub>4</sub>‑Ab1‑癌标,于37℃下震荡10~60min后磁分离,随后加入10~20mLpH为7.2的Tris缓冲溶液混合均匀,再次磁分离,然后加入到对硝基苯酚和硼氢化钠混合水溶液中,得混合溶液,通过对溶液中对硝基苯酚紫外‑可见光谱吸收的变化,即可实现癌症标志物抗原的检测。 |
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