一种人IgG4型抗体及其制备方法与应用

摘要

本发明涉及一种人IgG4型抗体及其制备方法与应用，属于生物技术领域。本发明人IgG4型抗体的制备方法，包括以下步骤：(1)采集患同种疾病患者的外周血，制备血浆或血清或者浆细胞培养的上清液；(2)制备以偶联了抗人IgG4抗体的琼脂糖凝胶为固定相的亲和层析柱；(3)通过亲和层析柱，纯化人IgG4型抗体。通过本发明人IgG4型抗体的制备方法，可获得具有个体或者同种疾病特征人IgG4型抗体；并且由于采用亲和层析柱进行分离，分离效果好，特异性高，纯化后制得的IgG4型抗体纯度高。

主权项

一种人IgG4型抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)制备血浆或血清或者浆细胞培养的上清液：采集同种疾病患者的外周血，离心，制得血浆或血清；或者在同种疾病患者的外周血中加入抗凝剂后，离心分离，获得外周血单个核细胞，再采用免疫磁珠分离制得B细胞，最后在体外诱导B细胞为浆细胞，并获得浆细胞培养的上清液；(2)制备亲和层析柱：以溴化氢活化琼脂糖凝胶，溶胀并抽干活化后的琼脂糖凝胶，向其中加入含有抗人IgG4抗体的NaHCO₃溶液，琼脂糖凝胶与抗人IgG4抗体发生偶联反应；再以pH值为7.8～8.0的缓冲溶液A封闭处理偶联了抗人IgG4抗体的琼脂糖凝胶，装柱；最后，依次用pH值为2.5～3.0的缓冲溶液B、pH值为7.2～7.6的PBS洗柱，得到以偶联了抗人IgG4抗体的琼脂糖凝胶为固定相的亲和层析柱，保存备用；(3)纯化人IgG4型抗体：将步骤(1)制得的血浆或血清或者浆细胞培养的上清液加入步骤(2)制得的亲和层析柱中，以pH值为7.2～7.6的PBS洗柱，再用pH值为2.5～3.0的缓冲溶液C洗脱人IgG4型抗体，收集洗脱液，并向其中加入pH值为8.8～9.0的缓冲溶液D将洗脱液中和至pH值为7.2～7.4，浓缩中和后所得的溶液进行并进行定量。