一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法

摘要

本发明公开了一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法，该方法步骤如下：制备I型液态鼠尾胶原；分离新西兰大白兔的输卵管上皮细胞，接种于I型液态鼠尾胶原上，培养建立输卵管上皮细胞的三维培养体系；分离新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞，接种于I型液态鼠尾胶原上，培养建立子宫内膜上皮细胞的三维培养体系；倾去输卵管上皮细胞的三维培养体系中的培养液，换成CZB为培养液，将小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系培养；倾去子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中的培养液，换成CZB为培养液，将发育至桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养。本发明可显著提高小鼠胚胎的体外发育率，改善发育质量。

主权项

一种利用三维序贯共培养进行胚胎体外培养的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：步骤一、制备I型液态鼠尾胶原；步骤二、分离新西兰大白兔的输卵管上皮细胞，接种于I型液态鼠尾胶原上，培养建立输卵管上皮细胞的三维培养体系；步骤三、分离新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞，接种于I型液态鼠尾胶原上，培养建立子宫内膜上皮细胞的三维培养体系；步骤四、倾去输卵管上皮细胞的三维培养体系中的培养液，换成CZB为培养液，将小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系培养；步骤五、倾去子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中的培养液，换成CZB为培养液，将发育至桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养；分离获得的新西兰大白兔的输卵管上皮细胞接种后采用DMEM培养液进行培养，培养时间为2‑3天；分离获得的新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞接种后采用DMEM培养液进行培养，培养时间为2‑3天；小鼠受精卵置于输卵管上皮细胞的三维培养体系中培养时间为24‑30小时；桑葚胚阶段的小鼠胚胎转入子宫内膜上皮细胞的三维培养体系中培养至囊胚阶段。