微生物细胞表面抗原的筛选与鉴定方法

摘要

微生物细胞表面蛋白抗原的筛选与鉴定方法，涉及一种简便、快捷筛选和鉴定微生物细胞表面蛋白抗原的方法。用微生物全细胞免疫沉淀分离出细胞表面蛋白的抗体，蛋白A/G琼脂糖捕捉抗原抗体复合物，洗脱得到抗原抗体复合物，再用SDS-PAGE分析免疫沉淀的蛋白。分析免疫原的丰度、抗体对抗原的亲和力、免疫原的定性、确定抗原的蛋白种类。建立基于免疫沉淀的蛋白质组学技术，用于高通量筛选具有免疫原性的蛋白质作为多价疫苗的候选靶位。根据免疫原的丰度和抗体对抗原的亲和力，能确定其作为疫苗蛋白的可能性。迅速确定某种微生物细胞表面具有免疫原性的蛋白，高效、快速、经济、实用。方法具有普遍性，不仅可以用于细菌，还可以用于真菌等微生物免疫原的鉴定。

主权项

微生物细胞表面抗原的筛选与鉴定方法，其特征在于其步骤如下：1）用微生物全细胞免疫沉淀分离出细胞表面蛋白抗体：微生物细胞收集后与微生物抗血清按体积比抗血清:微生物=1:500加入抗血清冰浴孵育，阴性血清作为对照，离心去除抗血清细胞表面抗体外其他成份，收集微生物细胞与细胞表面抗体复合物；2）将分离出的微生物细胞与细胞表面抗体复合物，超声波破碎后，用蛋白A/G琼脂糖与破碎液冰浴孵育，捕捉抗原抗体复合物，洗涤三次后，洗脱抗原抗体复合物；3）洗脱后的抗原抗体复合物SDS‑PAGE分析，用银染观察结果，确定阳性条带，再使用超滤管对抗原抗体复合物进行浓缩后在进行SDS‑PAGE电泳，考马斯亮蓝染色准备进行质谱；4）免疫原的定性：取出具有免疫原性的全部考染蛋白质条带，按常规质谱样品处理方法进行样品制备，然后进行质谱和生物信息分析，以确定抗原的蛋白质种类。