一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法

摘要

本发明公开了一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法。所述方法包括：1)优化MitTxα及MitTxβ基因序列；2)重组MitTxα及MitTxβ蛋白的表达与复性；3)MitTxα复性后溶液的阳离子交换纯化；4)MitTxβ复性后的阴离子交换纯化；5)将步骤3流穿产物的阳离子交换纯化；6)步骤2和4产物的结合实验。本发明可以得到MitTx蛋白纯品，可用于大规模生产和纯化，节约了纯化成本提高纯化效率。

主权项

一种重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)优化MitTxα及MitTxβ的编码序列，优化后的MitTxα的编码序列如SEQ ID NO.1所示，优化后的MitTxβ的编码序列如SEQ ID NO.2所示；(2)以优化后的MitTxα的编码序列为基础构建重组载体MitTxα‑pET22b；以优化后的MitTxβ的编码序列为基础构建重组载体MitTxβ‑pET22b；所述重组载体MitTxα‑pET22b的序列如SEQ ID NO.3所示；所述重组载体MitTxβ‑pET22b的序列如SEQ ID NO.4所示；(3)将重组载体MitTxα‑pET22b和重组载体MitTxβ‑pET22b转化大肠杆BL21表达菌株，并制备MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体；(4)分别对MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体进行复性；将复性后的MitTxα包涵体和MitTxβ包涵体分离纯化，得到MitTxα蛋白和MitTxβ蛋白，MitTxα蛋白和MitTxβ蛋白非共价结合，得到重组珊瑚蛇毒素蛋白MitTx。