犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测试剂及其检测方法

摘要

本发明属动物疫病检测检疫技术领域，公开了一种用于犬瘟热病毒（CDV）、犬细小病毒（CPV）二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测试剂及其检测方法。本发明所述的CDV/CPV二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测试剂包含1对基于CDV H基因设计的特异性引物和1条5'端标记为FAM的TaqMan MGB探针，1对基于CPV VP2基因设计的特异性引物和1条5'端标记为VIC的TaqMan MGB探针；所述的二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法包含2对引物序列、2条TaqMan MGB标记探针序列及标记荧光、总RNA和DNA的制备、反转录、荧光PCR扩增及结果判定等。本发明经过一个PCR反应可同时检测CDV和CPV两种病毒核酸，可同时对CDV/CPV进行快速、特异、敏感的鉴别检测，对犬瘟热、犬细小病毒病的防控具有重要意义。

主权项

一种鉴别犬瘟热、犬细小病毒二重TaqMan MGB荧光定量PCR检测试剂，其特征在于：包含1对基于CDV H基因设计的特异性引物P1/P2和1条5'端标记为FAM的TaqMan MGB探针Probe‑P5；1对基于CPV VP2基因设计的特异性引物P3/P4和1条5'端标记为VIC的TaqMan MGB探针Probe‑P6；所用的4条引物DNA序列、2条探针DNA序列及标记荧光为：引物P1：ggatggtgcc tgcattgg 18引物P2：ccgactccag acaatttttt tgt 23引物P3：atgccattta ctccagcagc tat 23引物P4：ggtatggttg gtttccatgg at 22探针Probe‑P5：5'‑FAM‑ ctctgagcaa caagaag ‑MGB‑3' 17探针Probe‑ P6：5'‑VIC‑ agatctgaga cattgggttt ‑MGB ‑3' 20 。