产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌的筛选法

摘要

本发明公开了一种产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌的筛选方法，依次进行以下步骤：1)、基于发酵菌液的抑菌活性进行初筛：以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，对待测菌株进行初筛，从而筛选出对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑菌性的丁酸梭菌；2)、通过PCR验证其抗菌肽butyrisin蛋白基因的表达；PCR阳性的菌株为产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌。采用本发明的方法能获得产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌。所述抗菌肽是指对包含但不限于的E.coli ATCC25922、E.coli K88和S.aureus ATCC25923等细菌具有抑菌活性。

主权项

产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌的筛选方法，其特征是依次进行以下步骤：1)、基于发酵菌液的抑菌活性进行初筛：以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为指示菌，对待测菌株进行初筛，从而筛选出对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有抑菌性的丁酸梭菌；2)、通过PCR验证其抗菌肽butyrisin蛋白基因的表达，依次进行以下步骤：①、基因组提取；②、PCR：根据已报道的分泌抗菌肽butyrisin的编码区进行引物设计，对提取的细菌基因组进行PCR扩增；反应体系(50μL)：10×PCR Buffer5μL；dNTPs(各2.5mM)1μL；引物F(10uM/μL)1μL；引物R(10uM/μL)1μL；基因组DNA(50ng/μl)1μL；TaKaRa Ex taq酶(5U/μL)0.5μL；MgCl₂(25mM)3μl；牛血清白蛋白BSA(10mM)2.5μl；加双蒸水至50μL；PCR扩增程序：94℃预变性5min；92℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸30s，进行30cycle；最后72℃延伸15min；③、琼脂糖检测：PCR产物利用1％琼脂糖凝胶电泳检测：PCR阳性的菌株为产高效抗菌肽butyrisin的丁酸梭菌。