一种粉绿狐尾藻组织培养与快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种粉绿狐尾藻组织培养与快速繁殖方法,其步骤是：A、外植体选择：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的植物茎作为外植体B、外植体灭菌：用酒精和氯化汞处理外植体。C、芽诱导：选择最佳的激素配比诱导芽生长。D、增殖培养：调整激素配比和培养基浓度进行增殖培养E、生根：选择合适的细胞生长素进行生根诱导。F、炼苗和移栽：在培养箱中打开瓶口培养两天，在转入自然水体中培养。该技术可以不受季节和环境限制，培养出大量无菌苗，供水生生态系统恢复之用。

主权项

一种粉绿狐尾藻组织培养与快速繁殖方法，其步骤是：A、外植体选择与预处理：选择生长健壮，颜色鲜绿，无病虫害的茎段作为外植体，用碱性洗涤剂浸泡30min，再在自来水下冲洗2h，用蒸馏水反复冲洗4‑5次，用无菌水再反复清洗4‑5次，置于无菌操作台；B、外植体灭菌：在无菌操作台上首先用70%乙醇浸泡15s，用无菌水冲洗4‑5次，再用0.1%氯化汞进行表面消毒2‑5min，无菌水冲洗4‑5次，放入0.15%（质量体积比）的无菌柠檬酸溶液中切割，在无菌滤纸上将水吸干，待用；C、愈伤组织和芽诱导：选择诱导培养基，接入0.5‑2cm的去除叶片的步骤B中的粉绿狐尾藻外植体，于光照培养箱中静置培养，诱导愈伤组织和幼芽；所述的诱导培养基的配方为：MS固体培养基+6‑BA 0.50‑1.50mg/L+NAA 0.25‑0.50mg/L+蔗糖3%，pH5.8‑6.0；D、增殖培养： 继续使用步骤C的培养基，用于增殖培养，或待幼芽生长到1.5‑2cm，更换至增殖培养基，进一步扩大繁殖，形成幼苗；每隔20‑25d继代一次，形成的幼苗，切成1‑2cm，转入诱导培养基或增殖培养基，在与步骤D相同培养条件下继续进行增殖培养，扩繁植株；所述的增殖培养基为： 1/2MS液体培养基+6‑BA 0.50‑1.50mg/L+ NAA 0.25‑0.50mg/L+蔗糖 1.5%；E、生根：愈伤组织不断生长，幼苗生长到4‑6cm，继续在步骤C的培养基上长出根，或更换至生根培养基，进行生根；所述的生根培养基为： 1/2MS液体培养基+NAA 0.10mg/L+蔗糖1.5%；F、炼苗和移栽：待不定根长至2.0cm时，打开瓶盖，室温下炼苗1‑2d后，取出试管苗，洗净其根部培养基，移栽至室外水体中；以上步骤C,D,E均为无菌环境，光照40‑60μE/（m²·s），光照周期为12h/d，室内温度25±2℃。