一种用于糖蛋白检测的电化学方法

摘要

本发明公布了一种用于糖蛋白检测的电化学方法，属于化学领域。该方法包括制备苯硼酸-生物素-纳米金复合物、含待测物工作电极的制备，电化学测试。采用本发明所提供的方法检测糖蛋白灵敏性高，较传统的方法不需要采用价格昂贵、易变性的抗体，本发明的方法成本较低，稳定性好。

主权项

一种用于糖蛋白检测的电化学方法，其特征在于：包括以下步骤：(A)制备苯硼酸‑生物素‑纳米金复合物，包括以下子步骤：A1：纳米金粒子的合成，采用前驱体为HAuCl₄，还原剂为柠檬酸钠，将HAuCl₄溶液加热至沸腾，然后快速加入柠檬酸钠溶液，继续加热沸腾10‑50分钟，然后将溶液冷却到室温，即得到柠檬酸稳定的纳米金粒子溶液；A2：苯硼酸‑生物素‑纳米金复合物的合成：用移液枪取出上述纳米金粒子溶液，然后加入包含三(2‑羧乙基)膦和多肽的PBS溶液，PBS溶液的pH 为7‑8，室温搅拌1小时以上得到生物素修饰的纳米金，再向反应溶液中加入4‑巯基苯硼酸溶液，继续搅拌0.5小时以上得到苯硼酸‑生物素‑纳米金复合物；A3：苯硼酸‑生物素‑纳米金复合物的纯化：将A2得到的反应产物离心分离，弃除上层未反应的多肽和三(2‑羧乙基)膦，将所得沉淀物用pH =7‑8的PBS溶液洗涤，将得到的纯化后的硼酸‑生物素‑纳米金复合物用PBS溶液分散，低温保存备用；（B）工作电极的制备，包括以下子步骤：B1：在金电极表面组装巯基化的核酸适配体；B2：采用6‑巯基己醇和牛血清蛋白封闭未反应的金电极表面；B3：将含糖蛋白的待测物修饰到B2得到的电极表面；B4：将步骤A制备得到的苯硼酸‑生物素‑纳米金复合物修饰到B3得到的电极表面；B5：将链霉亲和素‑碱性磷酸酶复合物修饰到B4得到的电极表面；B6：将B5得到的电极浸泡于p‑APP溶液中，催化产生电活性物质对氨基酚；（C）电化学测试：将步骤（B）制备得到的电极作为工作电极进行电性能测试。