合成性的多肽文库以及用于建立具有天然多样性的多肽变体的方法

摘要

本发明提供了一种组合物以及方法，所述的方法用以建立DNA序列文库，其中所述的DNA序列能够编码同源性多肽，以及所述的文库所具有的用以识别天然的经过多样性处理的多肽变体的用途。本发明同样提供了这样的组合物以及方法，所述的方法用以建立大量的合成性的抗体片段，在所述的抗体片段中所述的一个或者几个互补决定区域(CDR)被大量的所述相对应的从一种天然的来源中捕获到的互补决定区域(CDR)进行了取代。本发明进一步的提供了这样的组合物以及方法，所述的方法用以对一个多肽的一部分进行多样性处理，所述的多样性处理是通过下述的方式来实现的：插入一种具有合成性的来源或者天然来源的经过多样性处理的序列，而不需要对所述的初始多肽编码序列进行修饰。

主权项

一种用以制备大量的核酸的方法，其中每一个核酸能够编码人类免疫球蛋白的可变结构域，所述的人类免疫球蛋白可变结构域中包括大量的互补决定区域3(CDR3)序列，所述的互补决定区域3(CDR3)序列是分别从来自于一种哺乳动物物种的所述的免疫球蛋白可变结构域个体中分离得到的，其中，当被进行表达时，所述大量的互补决定区域3(CDR3)序列产生了适当折叠的互补决定区域3(CDR3)，所述方法包括：(a)提供大量的受体骨架核酸序列，该核酸序列能够编码截然不同的人类免疫球蛋白可变结构域，每一个受体骨架核酸序列中含有第一个骨架区域，第二个骨架区域，第三个骨架区域，以及第四个骨架区域，其中所述第一个骨架区域与第二个骨架区域的区域之间被互补决定区域1(CDR1)进行间隔，所述第二个骨架区域与第三个骨架区域的区域之间被互补决定区域2(CDR2)进行间隔，并且所述的第三个骨架区域以及第四个骨架区域的区域之间被填充核酸序列间隔，其中所述的填充核酸序列中包括至少两个被随机的核酸序列进行间隔的IIs型限制性酶识别位点；(b)提供大量的经过多样性处理的核酸序列，其能够编码互补决定区域3(CDR3)序列，该互补决定区域3(CDR3)序列是从一种哺乳动物物种的免疫球蛋白个体中分离出来的，其中所述的大量的经过多样性处理的核酸序列中的每一个序列在其每一个末端上包括IIs型限制性酶识别位点，并且其中所述的大量的经过多样性处理的核酸序列中的每一个能够编码适当折叠的互补决定区域3(CDR3)序列或者被进行表达时能够实现互补决定区域(CDR)所具备功能的适当折叠的氨基酸序列；(c)利用一种IIs型限制性酶对能够编码所述的互补决定区域3(CDR3)区域的大量的核酸序列中的每一个进行消化，其中IIs型限制性酶能够与步骤(b)中所述的IIs型限制性酶识别位点进行结合；以及，利用一种IIs型限制性酶对步骤(a)中所述的来自于所述的受体骨架之中的填充核酸序列进行消化，其中IIs型限制性酶能够与步骤(a)中所述的IIs型限制性酶识别位点进行结合；以及(d)将能够编码所述的互补决定区域3(CDR3)区域的经过消化的核酸序列或者能够编码步骤(c)中氨基酸序列的经过消化的核酸序列连结至步骤(c)中所述的每一个经过消化的受体骨架之中，这样一来可以利用能够编码所述的互补决定区域3(CDR3)区域的核酸序列或者能够编码氨基酸序列的核酸序列对所述第三个骨架区域以及第四个骨架区域的区域之间进行间隔，所述的氨基酸序列能够实现一种互补决定区域3(CDR3)区域所具备的功能，并且完整的免疫球蛋白可变结构域编码核酸序列被得以重新建立，其中所述编码核酸序列中不含有步骤(a)以及(b)中所述的IIs型限制性酶识别位点。