一种六胜肽的液相分段合成方法

摘要

本发明公开了一种六胜肽的液相分段合成方法，通过对六胜肽序列进行分段，分别合成了六胜肽序列中的三肽片段Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH和二肽片段H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH，然后以该三肽片段和二肽片段以活化酯方法合成了五肽片段Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-OH，再将该五肽片段与H-Arg-NH₂·2HCl缩合得到了保护六肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂，最终脱保护基得到六胜肽。本发明方法克服了固相反应中每步必须使用保护氨基酸、溶剂种类多、试剂明显过量及溶剂难以回收的缺点，具有合成方法简单、产品成本低、对环境更为绿色化等优点，可用于合成六胜肽。

主权项

一种六胜肽的液相分段合成方法，其特征在于它由下述步骤组成：（1）合成AcOSu将N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二氯甲烷按质量‑体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入二异丙基乙胺，搅拌，冰浴降温至0～5℃，滴加乙酰氯，保持溶液温度小于20℃，N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二异丙基乙胺、乙酰氯的摩尔比为1:1.1～1.5:1.05～1.5，滴加完后撤去冰浴，自然升至室温反应2～3小时，分离纯化产物，得到AcOSu；（2）合成Ac‑Glu(OtBu)‑OH将AcOSu与四氢呋喃或1,4‑二氧六环按质量‑体积比为1g:4～6mL混合，室温搅拌至溶解；将γ‑叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到AcOSu的四氢呋喃溶液或AcOSu的1,4‑二氧六环溶液中，AcOSu与γ‑叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.3:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4‑二氧六环的体积比为2～3:1，室温搅拌反应5～8小时，反应液减压浓缩至粘稠状，冷却至5～10℃，用质量分数为20%的柠檬酸水溶液调节pH值至2～3，5～10℃静置2～3小时，过滤，滤饼经水洗、干燥，得到Ac‑Glu(OtBu)‑OH；（3）合成Ac‑Glu(OtBu)‑COOSu将Ac‑Glu(OtBu)‑OH与四氢呋喃或1,4‑二氧六环按质量‑体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac‑Glu(OtBu)‑OH与N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Ac‑Glu(OtBu)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液；（4）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑OH将γ‑叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（3）得到的Ac‑Glu(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Ac‑Glu(OtBu)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液中，Ac‑Glu(OtBu)‑OH与γ‑叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4‑二氧六环的体积比为1～2:1，室温搅拌反应8～10小时，分离纯化产物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑OH；（5）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑COOSu将Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑OH与四氢呋喃或1,4‑二氧六环按质量‑体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑OH与N‑羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液；（6）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑OH将蛋氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（5）得到的Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液中，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑OH与蛋氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3.0，蒸馏水与四氢呋喃或1,4‑二氧六环的体积比为1:1～2，室温搅拌反应8～10小时，分离纯化产物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑OH；（7）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑COONp将Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑OH与二氯甲烷按质量‑体积比为1g:8～10mL混合，室温搅拌至溶解，加入对硝基苯酚，搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑OH与对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.2～1.5，室温反应6～8小时，分离纯化产物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑COONp；（8）合成Fmoc‑Gln(Trt)‑COOSu将Fmoc‑Gln(Trt)‑OH与四氢呋喃或1,4‑二氧六环按质量‑体积比为1g:8～10mL混合，室温搅拌至溶解，加入N‑羟基丁二酰亚胺，搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Fmoc‑Gln(Trt)‑OH与N‑羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.3:1.2～1.5，室温反应5～8小时，过滤除去固体不溶物，得到Fmoc‑Gln(Trt)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Fmoc‑Gln(Trt)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液；（9）合成Fmoc‑Gln(Trt)‑Arg‑OH将精氨酸与碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（8）得到的Fmoc‑Gln(Trt)‑COOSu的四氢呋喃溶液或Fmoc‑Gln(Trt)‑COOSu的1,4‑二氧六环溶液中，Fmoc‑Gln(Trt)‑OH与精氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3.0，蒸馏水与四氢呋喃或1,4‑二氧六环的体积比为1:1～3，室温搅拌反应10～12小时，分离纯化产物，得到Fmoc‑Gln(Trt)‑Arg‑OH；（10）合成H₂N‑Gln(Trt)‑Arg‑OH将Fmoc‑Gln(Trt)‑Arg‑OH与二氯甲烷按质量‑体积比为1g:8～10mL混合均匀，搅拌，加入哌啶或二乙胺，Fmoc‑Gln(Trt)‑Arg‑OH与哌啶或二乙胺的摩尔比为1:3～5，室温搅拌反应20～24小时，分离纯化产物，得到H₂N‑Gln(Trt)‑Arg‑OH；（11）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑OH将步骤（7）得到的Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑COONp与N,N‑二甲基甲酰胺按质量‑体积比为1g:6～8mL混合均匀，加入步骤（10）得到的H₂N‑Gln(Trt)‑Arg‑OH，室温搅拌至溶解；将碳酸氢钠溶于蒸馏水中，所得溶液滴加到H₂N‑Gln(Trt)‑Arg‑OH与Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑COONp的N,N‑二甲基甲酰胺溶液中，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑COONp与H₂N‑Gln(Trt)‑Arg‑OH、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3，N,N‑二甲基甲酰胺与蒸馏水的体积比为3～5:1，室温搅拌反应20～24小时，分离纯化产物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑OH；（12）合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑Arg‑NH₂将Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑OH与N,N－二甲基甲酰胺按质量‑体积比为1g:10～12mL混合，室温搅拌至溶解，依次加入二环己基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、H‑Arg‑NH₂·2HCl、N‑甲基吗啉，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑OH与二环己基碳二亚胺、1‑羟基苯并三唑、H‑Arg‑NH₂·2HCl、N‑甲基吗啉的摩尔比为1:1.2～1.5:1.2～1.5:1.5～2:5～10，室温搅拌36～48小时，分离纯化产物，得到Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑Arg‑NH₂；（13）制备六胜肽将Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑Arg‑NH₂加入二氯甲烷与三氟乙酸的体积比为1:1的混合液中，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑Arg‑NH₂与混合液的质量‑体积比为1g:10～16mL，室温搅拌至溶解，加入三异丙基硅烷，Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg‑Arg‑NH₂与三异丙基硅烷的摩尔比为1:5～10，室温搅拌反应4～6小时，分离纯化产物，得到六胜肽。