快速全面检测药用单克隆抗体N糖基化位点上寡糖的方法

摘要

本发明提供了一种快速全面检测药用单克隆抗体N糖基化位点上的寡糖的方法，其步骤如下：1)样品寡糖酶解；2)2-AB衍生化溶液配置；3)寡糖的衍生化；4)衍生后寡糖的纯化；5)衍生寡糖的LC-荧光-ESI-MS分析。本发明的方法能够有效快速准确地对单抗N糖基化进行分析，有利于对药用单抗分子作用机理的分析以及生产质量控制。

主权项

一种快速全面检测药用单克隆抗体N糖基化位点上的寡糖的方法，其步骤如下：1)样品寡糖酶解；2)2‑AB衍生化溶液配置；3)寡糖的衍生化；4)衍生后寡糖的纯化；5)衍生寡糖的LC‑荧光‑ESI‑MS分析：用配备荧光检测器的高效液相色谱仪，以及与高效液相色谱仪相连的、具有ESI离子源的高分辨质谱仪进行检测，液相色谱条件为：流动相A:100mM甲酸铵水溶液，用甲酸调节pH至4.5；流动相B:乙腈；柱子:phenomenex Asahipak,5μNH₂P‑50,150×2mm；柱温:50℃；进样体积:10μL；MS参数为：Vcap：4000V；Drying gas flow：10L/min；Gas temp：325℃；Fragmentor voltage：175V,m/z；range：300‑3200。