一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒及其使用方法，它的有效成分包括按体积比为1:1的标记免疫金纳米粒子试剂和Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂，是一种基于表面增强拉曼光谱和核壳磁性材料。将金纳米中表面羧基活化处理后，注入人附睾蛋白抗体，得到标记免疫金纳米粒子试剂；对Fe₃O₄表面进行氨基化修饰后再与金纳米粒子混合，注入人附睾蛋白抗体，得到具良好磁性及优良SERS增强活性的Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂。本发明提供的试剂盒使用条件温和，可采用便携式的检测仪器，无需大型仪器设备；对人附睾蛋白的检测限可达到飞克级水平，具有高灵敏性；试剂盒的基底具有可循环使用的特点，降低了检测成本。

主权项

一种人附睾蛋白免疫检测试剂盒，其特征在于它的有效成分包括按体积比为1:1的标记免疫金纳米粒子试剂和Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂；所述的标记免疫金纳米粒子的制备方法为：制备质量体积比为0.6%～1%的粒径为35～50 nm的金纳米粒子分散液，取浓度为1mmol/l的4‑巯基苯甲酸标记分子2 μl加入到1 ml的金纳米粒子分散液中，离心分散后，按摩尔比2～5:1，依次加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺，进行表面羧基活化处理后，注入人附睾蛋白抗体，孵育2～3 h，再进行离心分散,加入牛血清白蛋白封闭剩下的活性位，得到标记免疫金纳米粒子试剂；所述的核壳结构Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子的制备方法为：制备质量体积比为15～20%的Fe₃O₄分散液，取浓度为1mmol/l的氨丙基三甲基硅烷 90～100 μl加入到1 ml的Fe₃O₄分散液中，得到表面氨基化修饰的Fe₃O₄；按质量比5～10:1,将粒径为2～5nm的金纳米粒子加入到表面氨基化修饰的Fe₃O₄分散液中混合，得到Fe₃O₄‑ Au纳米复合物；利用种子生长法制备得到Fe₃O₄@Au核壳纳米粒子；注入浓度为5mg/ml的人附睾蛋白抗体8～10μl，得到核壳结构Fe₃O₄@Au免疫纳米粒子试剂。