一种夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备和应用

摘要

本发明公开了一种夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法及在肺癌肿瘤标志物的检测中的应用，属于新型纳米功能材料和生物传感器领域。本发明利用贵金属纳米材料金@银核壳纳米棒作为生物模拟酶，与二抗孵化后作为标记物，同时利用的金纳米棒和还原石墨烯两种纳米材料作为电极修饰物，从而制备了一种成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速、制备简单的检测肺癌肿瘤标志物的夹心型电化学免疫传感器。

主权项

一种夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器的制备方法，所述夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器包括：工作电极、参比电极和对电极，所述工作电极的基底电极为玻碳电极，其表面依次修饰还原石墨烯、金纳米棒溶胶Au NRs、壳聚糖、肺癌肿瘤标志物一抗Ab₁、牛血清蛋白、肺癌肿瘤标志物抗原和金@银核壳纳米棒溶胶孵化的肺癌肿瘤标志物二抗Au@AgNRs‑Ab₂，所述参比电极为饱和甘汞电极，所述对电极为铂丝电极，所述Au NRs为20~40nm长的棒状金纳米粒子的水溶液；其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：a、制备Au@AgNRs‑Ab₂；b、制备夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器工作电极；其中，步骤a制备Au@AgNRs‑Ab₂的具体步骤如下：将20mLAu NRs和20mL 0.05~0.2 mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液混合，在30~45℃下搅拌，并顺序加入3~6 mL 0.1 mol/L的 L‑抗坏血酸溶液、0.5~1 mL 0.05 mol/L的硝酸银溶液和 3~6 mL 0.1 mol/L的氢氧化钠溶液，停止搅拌，静置1~3h，离心分离，加入20mL pH7.4的PBS缓冲溶液中，然后再加入肺癌肿瘤标志物二抗Ab₂，在4℃下震荡24h，得到Au@AgNRs‑Ab₂；步骤b制备夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器工作电极的具体步骤如下：1）对工作电极进行预处理，使其表面光洁；2）在1）中得到的电极表面滴加5~10 µL 1~5 mg/mL的还原石墨烯水溶液，室温下自然晾干；3）在2）中得到的电极表面滴加5~10 µL的Au NRs，室温下自然晾干；4）在3）中得到的电极表面滴加3~6 µL 质量分数为0.5% 的壳聚糖溶液；5）在4）中得到的电极表面滴加5~8 µL 10 µg/mL的Ab₁溶液，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，晾干成膜，4 ℃保存；6）在5）中得到的电极表面滴加3~6 µL 1%的牛血清蛋白溶液，用以封闭电极上的非特异性活性位点，4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，晾干成膜，滴上一系列浓度不同的肺癌肿瘤标志物抗原溶液；7）在6）中得到的电极表面滴加4~6 µL 预先孵化好的Au@AgNRs‑Ab₂溶液， 4 ℃ 冰箱中保存晾干，超纯水清洗，晾干成膜，即得到夹心型肺癌肿瘤标志物免疫传感器的工作电极。所述的壳聚糖溶液是将壳聚糖纯品加入到体积分数为1% 的醋酸中制备而成。