裸花紫珠无菌播种与快速组培繁殖方法

摘要

本发明公开了裸花紫珠高效快速组织培养的方法。该方法选取裸花紫珠的成熟种子，经初代培养形成不定芽，利用不定芽进行继代增殖及生根培养。采用此组织培养方法繁殖裸花紫珠，操作简单，繁殖率高，可快速大量生产性状一致的裸花紫珠组培苗，解决了播种出苗率低，扦插繁殖系数小而致繁殖速度过慢的问题。该技术可用于工厂化生产，将对裸花紫珠的保护、开发和利用提供有效的新途径，具有重要的经济、社会和生态效益。

主权项

裸花紫珠无菌播种与快速组培繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：(1)材料与外植体消毒：选用裸花紫珠成熟种子，将裸花紫珠种子在自来水中清洗干净后用纱布包裹，在超净工作台上，先用浓度为75％酒精浸泡10s，无菌水冲洗3次，再用浓度为0.1％HgCl₂溶液浸泡10min，再用无菌水冲洗5次；(2)种子诱导培养基的制备：以MS为基本培养基,添加蔗糖30g/L、卡拉胶6g/L，pH 5.8，配制后,于温度121℃、压力0.14MPa高温高压灭菌20min；(3)种子的萌发：将已消毒好的种子接入步骤(2)种子诱导培养基中，培养25天后开始萌发，培养温度为24～28℃，光照强度1500lx，光照时间8h/d；(4)丛生芽的诱导：切取小苗上端0.8～1.0cm长转入增殖培养基中，28～30天可分化出5～6个芽，萌发出的新芽用解剖刀切分转入相同的培养基中进行增殖培养；增殖培养基为MS+6‑BA 2.00mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.0g/L，pH 5.8；(5)丛生芽继代增殖:丛生芽接入培养基MS+6‑BA 2.00mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.0g/L，pH 5.8，置于温度为24～28℃，光照强度为1500lx的培养室中培养，光照时间8h/d，继代时间为30～40d；(6)生根培养：将高度达到2cm的小苗进行生根培养，培养基为MS+NAA0.5～0.75mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.0g/L，pH 5.8，培养温度为24～28℃，光照强度1500lx，光照时间8h/d；(7)组培苗的炼苗与移栽：无根苗在生根培养基中培养30天后，苗高3～5cm，根5条以上，将其移入拱棚内炼苗7～15天后移栽；小苗从培养袋中取出后，用清水洗去根部残留的培养基，栽植于下列体积比为1:1:1混合基质中：河沙、珍珠岩和表土，种后浇透水，盖上透明塑料薄膜，注意遮阴，20天揭去覆盖的透明薄膜，常规管理。