一种基于核酸适体的水胺硫磷和丙溴磷的荧光检测方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体是一种基于核酸适体的水胺硫磷和丙溴磷的荧光检测方法。其检测的原理为将核酸适体5′末端标记上荧光基团，设计了一段与核酸适配体互补杂交的序列并在3′末端标记猝灭基团，核酸适体与互补序列杂交时荧光信号很弱，水胺硫磷、丙溴磷识别结合核酸适体时会引起互补序列解离而荧光信号增强，利用荧光信号的变化来建立标准曲线，确定最低检出限和线性范围，根据标准曲线判断样品中靶标分子的含量。该方法快速简单，具有较高的灵敏度和选择性，适用于样品中水胺硫磷和丙溴磷的快速检测。

主权项

一种基于核酸适体的水胺硫磷和丙溴磷的荧光检测方法，基于核酸适体结构转换信号，其特征是包括如下步骤：1)、将核酸适体F‑ssDNA与互补序列Q‑B杂交；2)、加入标准品、样品组进行反应，并预留空白实验作为对照组，标准品含有系列浓度的水胺硫磷和丙溴磷；3)、检测各体系的荧光强度，计算荧光强度的变化；4)、建立标准曲线，确定最低检出限和线性范围；所述核酸适体F‑ssDNA是5′末端标记荧光基团FAM的识别水胺硫磷和丙溴磷的35个碱基的单链DNA，序列为：5′‑FAM‑AGCTTGCTGCAGCGATTCTTGATCGCCACAGAGCT‑3′；所述互补序列Q‑B是3′末端标记DABCYL的15个碱基的单链DNA，序列为：5′‑GAATCGCTGCAGCAA‑DABCYL‑3′；所述互补序列Q‑B与核酸适体F‑ssDNA杂交的部位从核酸适体5′末端起第4个碱基至第18个碱基，杂交后双链的序列为：