多重蓝莓病毒的早期防治技术

摘要

本发明提供了蓝莓培育的方法，用于在蓝莓培育的过程中防治或降低病毒污染，其包括对蓝莓进行预处理，获得消毒的根尖；在培养基上将根尖培养成再生植株幼芽；在培养基上将幼芽培养成小苗；在培养基上使得小苗长成试管苗；并任选分组取样并检测其中的样品是否侵染病毒，尤其是特定病毒。另外，本发明还提供了多重RT-PCR同步快速检测蓝莓病毒的方法，其中采用了混合引物对。

主权项

蓝莓培育的方法，其包括1)将蓝莓放入灭菌细沙内于37±3℃下进行热处理，直至抽生根系；取1‑2cm长的主根根尖，消毒并水洗后，直接将前端0.1‑0.2mm根尖切下作为外植体；2)将根尖接种在培养基上，在23±3℃、光照16±2小时/天下培养，培养的初始六周的光强由1000±200lux渐变至4000±500lux，然后继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+BA0.1‑0.3mg/L+ZT 0.3‑0.5mg/L+2，4‑D 0.1‑0.3mg/L+水解乳蛋白0.8‑1.2g/L+蔗糖15‑25g/L；3)将幼芽接种在培养基上，在23±3℃，光强3000±500lux、光照16±2小时/天下培养，直至长成8‑12cm长的小苗，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+BA 0.2‑0.5mg/L+ZT 0.3‑0.5mg/L+NAA 0.05‑0.1mg/L+水解乳蛋白0.8‑1.2g/L+蔗糖15‑25g/L；4)将小苗接种到培养基上，在23±3℃，光强2500±500lux、光照16±2小时/天下培养，直至长出根系，其中所述培养基的配方是：MS基本培养基+ZT0.3‑0.5mg/L+NAA 0.1‑0.3mg/L+水解乳蛋白0.8‑1.2g/L+蔗糖15‑25g/L；和5)任选地，对步骤1)获得的根尖、步骤2)获得的幼芽、步骤3)获得的小苗和/或步骤4)获得的试管苗之任一或多种进行分组取样，检测样品是否侵染病毒，并弃去侵染病毒的样品所在的组,其中检测样品是否侵染病毒是通过采用由P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7、P8、P9和P10组成的混合引物对的RT‑PCR进行检测的，其中混合引物对中P1：P2：P3：P4：P5：P6：P7：P8：P9：P10的含量比为0.4：0.4：0.6：0.6：0.8：0.8：0.7：0.7：0.9：0.9，其中，P1的核苷酸序列是5’‑GTAGTATTTAATTATATAGTTG‑3’P2的核苷酸序列是5’‑GGTATATATTCGAATTTTGG‑3’P3的核苷酸序列是5’‑CAGTTATGCCTCCGAAAG‑3’P4的核苷酸序列是5’‑CCCGCATTTCGATGATTGCG‑3’P5的核苷酸序列是5’‑TTTATTCAATTTCGAAGCGAA‑’P6的核苷酸序列是5’‑TTCGCTTCGAAATTGAATAAA‑’P7的核苷酸序列是5’‑GACGAAGTTATCAATA‑3’P8的核苷酸序列是5’‑TCCGTCCAATCACGCGAATA‑3’P9的核苷酸序列是5’‑TGACATTGCTTGTGGTAATTT‑3’P10的核苷酸序列是5’‑AAATTACCACAAGCAATGTCA‑3’。