一种生物活性酶及其提取工艺

摘要

本发明涉及一种生物活性酶及其提取工艺。具体而言，本发明提供的生物活性酶从血红细胞中提取得到，本发明在制备生物活性酶的过程中，将洗净后的血红细胞与柠檬酸缓冲液混合，破碎血红细胞，离心取上清液，采用硫酸铵沉淀法获得沉淀；本发明避免使用现有技术中常用的透析或有机溶剂沉淀法，选择Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱和金属螯合亲和柱对生物活性酶进行纯化，并针对生物活性酶的特性，选择了特定pH值的磷酸盐缓冲液作为洗脱液，成功获得了高纯度的生物活性酶。本发明提供的生物活性酶提取工艺操作简便，安全、环保；经检测，本发明提供的生物活性酶纯度高，且具有良好的抗氧化活性。

主权项

一种生物活性酶，其特征在于，所述生物活性酶由包括以下步骤的方法制备而成：1)将洗净后的血红细胞与pH4.8～5.2的0.015～0.025mol/L柠檬酸缓冲液混合，破碎血红细胞，离心取上清液，即得粗酶液；2)在步骤1)所得粗酶液中加入硫酸铵，静置，离心，收集沉淀；将沉淀溶解于pH7.0～7.4的0.01～0.02mol/L磷酸盐缓冲液中，将所得溶液加入平衡好的葡聚糖凝胶柱Sephadex G‑25顶端，用本步骤所述磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质且不含硫酸铵的洗脱液，浓缩，得浓缩液；3)在步骤2)所得浓缩液中加入NaCl，得到NaCl浓度为0.4～0.6mol/L的溶液，将所得溶液加入平衡好的金属螯合亲和柱顶端，用pH 5.8～6.2的0.015～0.025mol/L磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集含有蛋白质的洗脱液；4)将步骤3)所得洗脱液浓缩，冷冻干燥，即得生物活性酶。