一种癌性胸腹水来源的TIL细胞的高效扩增方法

摘要

本发明目的是提供一种癌性胸腹水来源的TIL细胞的高效扩增方法，本发明所制备出的TIL细胞具有增殖速度快、细胞数量大、细胞活性高等特点。本发明的主要特点是：利用层粘连蛋白和纤维连接蛋白包被的培养瓶对TIL进行培养，这两种蛋白的吸附作用可以使细胞成半贴壁状态，从而利于细胞接受各种因子的刺激，并且这两种蛋白本身就有对TIL细胞增殖的促进作用；而抗OX-40单克隆抗体的使用可以刺激TIL细胞中CD3⁺CD8⁺T细胞亚群的共刺激信号，促进细胞的活化，提高细胞穿孔素和颗粒酶的表达，增强其杀伤能力。到目前为止，仍未见有将层粘连蛋白、纤维连接蛋白和抗OX-40单克隆抗体联合应用于TIL细胞制备的研究报道，本发明首次提供出一种在TIL细胞制备中通过添加以上三种因子提高细胞数量和杀伤活性的方法。

主权项

一种TIL 细胞的培养方法，包括如下的步骤：1) 将层粘连蛋白和纤维连接蛋白溶解稀释后，加入到细胞培养瓶中包被；2) 将从胸腹水分离得到的TIL 细胞用培养液重悬后，接种到包被后的培养瓶中；添加IL‑2 刺激；且培养液中添加有25mg/L 的小球藻生长因子。3) 培养4 天后，将细胞转移到透气的细胞培养袋中继续扩大培养，并添加抗OX‑40 单克隆抗体；4) 持续扩大培养至第20 天时，完成高效TIL 细胞的培养。