一种制备头孢菌素C酰化酶固定化酶的方法

摘要

本发明提供了一种制备头孢菌素C酰化酶固定化酶的方法，该方法包括以下步骤：(1)将大肠杆菌发酵液用陶瓷膜浓缩后，用磷酸盐缓冲液透析，高压破碎后，得细胞破碎液；(2)在细胞破碎液中加入由硫酸铝、硫酸亚铁和中性聚丙烯酰胺组成的混合絮凝剂，在室温下絮凝；加入硅藻土，离心收集上清液；(3)在上清液中加入复合硫酸盐后加热；冷却至室温后，加入硅藻土，离心收集上清液；(4)用聚丙烯晴材质的中空纤维膜浓缩，用磷酸盐缓冲液透析，得浓缩酶液；(5)在浓缩酶液中加入固定化载体，酶与载体充分结合后抽滤，即得。本发明进一步保护所述方法制备得到的头孢菌素C酰化酶固定化酶及其应用。

主权项

一种制备头孢菌素C酰化酶固定化酶的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)取大肠杆菌发酵液，用陶瓷膜浓缩至原体积的1/4～1/5，加入磷酸盐缓冲液透析，收集浓相菌液；在850～900Mpa压强下低温破碎，得细胞破碎液；(2)在步骤(1)所得细胞破碎液中加入4.8～5.2g/L硫酸铝，4.8～5.2g/L硫酸亚铁和0.02～0.03g/L中性聚丙烯酰胺，在室温下絮凝50～70min；加入硅藻土，搅拌均匀后离心，收集上清液；(3)在步骤(2)所得上清液中加入1.9～2.1g/L复合硫酸盐，充分溶解后，加热至45～55℃，维持25～35min；冷却至室温后，加入硅藻土，搅拌均匀后离心，收集上清液；(4)取步骤(3)所得上清液，用聚丙烯晴材质的中空纤维膜浓缩至原体积的2/5～1/3，加入磷酸盐缓冲液透析，得浓缩酶液；(5)在步骤(4)所得浓缩酶液中加入0.8～0.92kg/L环氧型树脂，室温下搅拌45～55h，抽滤，收集固体，即得头孢菌素C酰化酶固定化酶。