Elisa法捕获针对呼吸道合胞病毒记忆性B细胞的方法

摘要

Elisa法捕获针对呼吸道合胞病毒记忆性B细胞的方法，是采用特异性抗原与抗体相结合的理论，通过呼吸道合胞病毒抗原蛋白GD和FD包被Elisa板，然后将分离得到的人外周血单核细胞加入到已经封闭清洗后的Elisa板中，由于人外周血单核细胞中的针对呼吸道合胞病毒的记忆性B细胞表面有IgM和IgD,包被在Elisa板上的呼吸道合胞病毒抗原蛋白GD和FD能特异地结合IgM和IgD，从而将针对呼吸道合胞病毒的记忆性B细胞从人外周血单核细胞中分离出来。本发明所述方法操作简单，分离快速、高效，能够大量节省人力物力财力，适用于针对任何病毒的记忆性B细胞的快速分离，此外，也可全面监测RSV感染者。

主权项

Elisa法捕获针对呼吸道合胞病毒记忆性B细胞的方法，其特征是：A、呼吸道合胞病毒抗原蛋白的包被：将呼吸道合胞病毒抗原蛋白GD和FD分别按100ng/孔，每孔100μL包被Elisa板，4℃过夜；B、人外周血单核细胞的分离：将采集的新鲜抗凝血与生理盐水1:1稀释后，缓慢加入到等体积的淋巴细胞分离液中，离心速度2000rpm, 离心20min,；将其拿出，并吸取第二层乳白色云雾状的人外周血单核细胞层于装有生理盐水的15mL离心管中洗涤，离心速度1500rpm,离心5min,弃上清，再用生理盐水洗涤1次，将收集到的细胞用10% FBS的1640培养基重悬于细胞培养瓶中；C、Elisa法捕获针对呼吸道合胞病毒的记忆性B细胞：将过夜包被的Elisa板用含0.05% Tween20的PBS清洗5次；再按200μL/孔加入5%的脱脂奶，37℃封闭2h，洗板5遍；最后按50μL/孔加入上述分离的人外周血单核细胞，37℃放置1h，洗板5遍；显微镜下观察到的细胞即为Elisa法捕获的针对呼吸道合胞病毒的记忆性B细胞。