一种重组人源CYP3A4/CPR/cyt b5蛋白共转染共表达的方法

摘要

本发明公开了重组人源CYP3A4/CPR/cyt b5蛋白共转染共表达的方法，将分别带有CYP3A4、CPR、cyt b5cDNA片段的表达载体和筛选质粒共同转染进果蝇S2细胞中，表达载体整合入果蝇细胞基因组中，用杀稻瘟菌素筛选得到稳转单克隆细胞株，稳转单克隆细胞株经扩大培养，诱导表达CYP3A4，CPR，cyt b5三种蛋白。本发明中，重组载体易构建且稳定性高，可同时表达三种蛋白，具有高表达量高活性等优点。本发明可广泛应用于体外药物代谢和药物筛选开发及应用等研究。

主权项

一种重组人源CYP3A4/CPR/cyt b5蛋白共转染共表达的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)构建重组表达质粒：通过PCR扩增方法分别得到CYP3A4、CPR、cyt b5的除去起始密码子和终止密码子的cDNA片段；分别在所述cDNA两端引入酶切位点，经连接反应将所述cDNA插入至载体pMTBip/V5‑HisA，分别得到CYP3A4蛋白的重组表达质粒、CPR蛋白的重组表达质粒、cyt b5蛋白的重组表达质粒；(2)将前述得到的CYP3A4蛋白的重组表达质粒、CPR蛋白的重组表达质粒、cyt b5蛋白的重组表达质粒、以及筛选质粒同时转染入果蝇S2细胞中，细胞培养后用抗生素进行筛选；(3)筛选得到稳转细胞株，经CuSO₄诱导，同时表达CYP3A4蛋白、CPR蛋白、cyt b5蛋白。