B型肉毒梭状芽孢杆菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种B型肉毒梭状芽孢杆菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒及检测方法，其中试剂盒借助生物信息平台进行大规模基因组分析，根据B型肉毒梭状芽孢杆菌的产毒素基因设计了四条特异性引物，结合LAMP技术，针对B型肉毒梭状芽孢杆菌建立了快速灵敏准确的检测方法，并构建用于该方法的快速检测试剂盒。使用本发明的快速检测试剂盒和检测方法，在反应后可通过肉眼观察鉴定，无需电泳等其他任何分析步骤，具有检测时间短、特异性强、仪器设备要求低、操作简便等优点，可用于食品、临床及环境等样品的安全快速检测。

主权项

一种B型肉毒梭状芽孢杆菌环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒，其特征在于包括以下试剂：（1）反应液1：10mmol/L脱氧核苷三磷酸、10×ThermoPol Buffer反应缓冲液、150mmol/L硫酸镁、5mol/L甜菜碱和灭菌双蒸水；（2）反应液2：10μmol/L外引物1、10μmol/L外引物2、40μmol/L内引物1和40μmol/L内引物2，引物序列如下：外引物1：GTGTTCCACTCGAAGAGTT外引物2：CATATTCTGGGCAAAACTTCA内引物1：TTCGCTCCACTTCTCCTGGACAAACATTGCTAGTGTAACTGTT内引物2：ACCTGGGCCAGTTTTAAATGAAAATTATACCCCCGAAGCCTTC；（3）8U/μL Bst DNA聚合酶；（4）显色剂：质量浓度为10%的SYBR Green I荧光染料；上述环介导恒温基因扩增快速检测试剂盒中反应液1折合每样品19μL，其组成为：10mmol/L脱氧核苷三磷酸4μL、10×ThermoPol Buffer反应缓冲液2.5μL、150mmol/L硫酸镁1μL、5mol/L甜菜碱5μL和灭菌双蒸水6.5μL；反应液2折合每样品3μL，其组成为：10μmol/L外引物1 0.5μL、10μmol/L外引物2 0.5μL、40μmol/L内引物1 1μL和40μmol/L内引物2 1μL。