一种多重miRNA肿瘤标志物检测方法及其应用

摘要

本发明提供了一种多重miRNA肿瘤标志物检测方法及其应用，通过获取包含有目标miRNA的总RNA样本溶液，将样本溶液与等量DNA-RNA嵌合探针混合后，得到嵌合探针，再用RNase ONE核糖核酸酶降解互补核酸双链中发生错配或部分互补的单链RNA，最后采用化学发光法测定目标miRNA量。本发明操作简便，特异性高，适用于肿瘤的筛查与早期诊断方面的应用。

主权项

一种多重miRNA肿瘤标志物检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对临床血液样本进行前处理，获取包含有目标miRNA的总RNA样本溶液；(2)将样本溶液与等量DNA‑RNA嵌合探针混合后，通过升温和降温退火的方式，使探针的RNA部分与其目标miRNA杂交，得到嵌合探针；(3)将5’端修饰氨基的DNA捕捉序列与活化后的酶标板孔中的化学基团通过酰胺反应进行连接；(4)将步骤(2)中得到的嵌合探针加入到步骤(3)中已连接DNA捕捉序列的酶标板孔中进行核酸链之间的杂交作用，形成酶标板‑嵌合探针‑miRNA复合物；(5)往酶标板孔中加入核糖核酸酶降解双链RNA中发生错配或部分互补的单链RNA；(6)通过化学发光法检测目标miRNA量。