一种肠道病毒71型灭活疫苗抗原酶联免疫检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种肠道病毒71型灭活疫苗抗原酶联免疫检测试剂盒，所述检测试剂盒包含：预包被抗肠道病毒71型多克隆抗体酶标板、样品稀释液、第二抗体、酶标抗体、浓缩洗涤液、酶底物溶液和终止液。酶标板预先包被由重组肠道病毒71型结构蛋白1作为免疫源制备得到的多克隆抗体，第二抗体为由钥孔血蓝载体蛋白偶联多肽序列FGEHKQEKDL作为免疫源制备得到的单克隆抗体；酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体；抗原标准品置于盒内。本发明在测定EV71病毒灭活疫苗抗原滴度时，具有较好的灵敏度，在5.9-750ng/ml范围内具有较好的线性，线性相关系数r²大于0.99。本发明所提供的试剂盒是一种特异性好、定量准确、灵敏度高、重复性好、简单方便的测定EV71病毒灭活疫苗抗原滴度的检测试剂盒。

主权项

一种肠道病毒71型灭活疫苗抗原酶联免疫检测试剂盒，所述检测试剂盒包含：预包被抗肠道病毒71型多克隆抗体酶标板、样品稀释液、第二抗体、酶标抗体、浓缩洗涤液、酶底物A溶液、酶底物B溶液、终止液和抗原标准品, 其特征在于酶标板预先包被由重组肠道病毒71型结构蛋白1作为免疫源制备得到的多克隆抗体，包被液为碳酸盐缓冲液，包被量为0.5‑2微克/孔，包被后酶标板用1%‑3%的牛血清白蛋白封闭；样品稀释液为含有1%‑3%的牛血清白蛋白及0.1%吐温‑20，pH7.2‑7.4的10毫摩尔/升磷酸盐缓冲液；第二抗体为由钥孔血蓝载体蛋白偶联多肽序列FGEHKQEKDL作为免疫源制备得到的单克隆抗体，用样品稀释液稀释500‑2000倍使用；酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠免疫球蛋白抗体，用样品稀释液稀释500‑2000倍使用；酶底物A溶液为3,3',5,5'‑四甲基联苯胺0.5g，丙酮 3.5 ml，乙醇 46.5 ml，氨基比林 0.2g，柠檬酸2.1g，乙二胺四乙酸钠 0.3g，加水定容到1000ml后混匀；酶底物B溶液为十二水磷酸氢二钠36.85g，30%双氧水155ul，加水定容到1000ml后混匀。